戊型肝炎病毒IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2022年第36號(hào)）

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戊型肝炎病毒IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)戊型肝炎病毒IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)戊型肝炎病毒IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑的一般要求，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對(duì)注冊(cè)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）屬于戊型肝炎病毒科，是戊型肝炎的病原體。戊型肝炎病毒感染見(jiàn)于世界各地，傳播途徑主要是糞-口傳播，此外食用未煮熟的源自受感染的動(dòng)物的肉、輸血和人畜交叉感染也是重要的傳播途徑。戊型肝炎通常具有自限性，2~6周就可自愈，部分發(fā)展成重型肝炎（急性肝衰竭）或慢性肝炎，嚴(yán)重可導(dǎo)致死亡。孕婦感染戊肝病毒后有較高的急性肝衰竭、流產(chǎn)和死亡風(fēng)險(xiǎn)。戊型肝炎病毒引起的急性感染癥狀與甲型肝炎類似。

戊型肝炎病毒直徑約27~34nm，基因組為單股正鏈RNA，含有3個(gè)開(kāi)放閱讀框架（ORF1、ORF2和ORF3）。與人類疾病相關(guān)的HEV主要有4個(gè)基因型，其中HEV-1和HEV-2僅見(jiàn)于人類，HEV-3、HEV-4在豬、野豬、鹿等若干動(dòng)物中傳播，也可造成人類感染。但目前普遍認(rèn)為HEV只有一種血清型。

戊型肝炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法包括肝功能指標(biāo)、抗原檢測(cè)、抗體檢測(cè)和核酸檢測(cè)。血清特異性抗體檢測(cè)是目前輔助診斷戊型肝炎的重要手段，免疫層析法、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法抗體檢測(cè)試劑在臨床中廣泛應(yīng)用。

本指導(dǎo)原則適用于以抗原抗體反應(yīng)為原理，包括免疫層析法、酶聯(lián)免疫法或化學(xué)發(fā)光法等，體外定性檢測(cè)人體樣本（如血清、血漿、全血）中的戊型肝炎病毒IgM和/或IgG抗體的試劑。結(jié)合臨床和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，可用于戊型肝炎病毒感染的輔助診斷。本指導(dǎo)原則適用于注冊(cè)申請(qǐng)和變更注冊(cè)申請(qǐng)的情形。本指導(dǎo)原則僅針對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號(hào)）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1. 產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》（國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局令第48號(hào)）及相關(guān)法規(guī)的要求，如戊型肝炎病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2. 其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、主要研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。產(chǎn)品描述中應(yīng)說(shuō)明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理和特點(diǎn)。同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢測(cè)原理、特異性抗原等主要組成成分、樣本類型等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

（三）非臨床資料

1. 產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（2022年第8號(hào)）的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

如有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。

戊型肝炎病毒IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陽(yáng)性參考品符合率、陰性參考品符合率、精密性、批間差、最低檢測(cè)限等。

如該項(xiàng)目已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求，并使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)三批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。

2. 分析性能研究

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)的試劑進(jìn)行的所有性能評(píng)估資料，包括具體研究方法、實(shí)驗(yàn)方案、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能評(píng)估的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中進(jìn)行描述，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)，采用的試劑名稱、規(guī)格和批號(hào)，儀器名稱和型號(hào)，樣本類型和來(lái)源等。分析性能評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國(guó)際或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行，建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。戊型肝炎病毒IgM和IgG抗體的性能應(yīng)分別研究。

2.1 樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及儲(chǔ)存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗(yàn)證，以確認(rèn)樣本的保存條件及保存時(shí)間?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)，每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性?？衫鋬霰４娴臉颖具€應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗(yàn)證。

2.2 適用的樣本類型

如產(chǎn)品同時(shí)適用于血清和血漿，可采用同源比對(duì)方式驗(yàn)證樣本的可比性。

2.3 企業(yè)參考品檢驗(yàn)

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用至少三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.4 精密度

應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。應(yīng)考慮運(yùn)行、時(shí)間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)。

設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的檢測(cè)。至少采用3個(gè)水平的真實(shí)樣本進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)。具體要求如下：

①陰性樣本：待測(cè)物濃度低于最低檢測(cè)限或?yàn)榱銤舛?，陰性符合率?yīng)為100%（n≥20）。

②臨界陽(yáng)性樣本：待測(cè)物濃度略高于試劑的最低檢測(cè)限，陽(yáng)性檢出率應(yīng)大于95%（n≥20）。

③中/強(qiáng)陽(yáng)性樣本：待測(cè)物濃度呈中度到強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為100%，變異系數(shù)（CV）應(yīng)在合理的可接受范圍內(nèi)（n≥20），或條帶結(jié)果顯色均一。

2.5 包容性

應(yīng)選擇來(lái)源于不同時(shí)間、不同地域的多份臨床確診為戊型肝炎病毒抗體陽(yáng)性的患者樣本、商業(yè)化血清盤進(jìn)行驗(yàn)證，建議至少覆蓋HEV-1至HEV-4四個(gè)基因型，驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)包括重復(fù)性、檢出限等，提供樣本及濃度的確認(rèn)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.6 最低檢測(cè)限

建議采用已明確戊型肝炎病毒抗體滴度的臨床陽(yáng)性樣本，采用陰性樣本進(jìn)行系列稀釋，進(jìn)行最低檢測(cè)限的建立和驗(yàn)證。應(yīng)采用合理方法確認(rèn)抗體類型和滴度，提供詳細(xì)的確認(rèn)方法及結(jié)果。

2.6.1最低檢測(cè)限的確定

建議選取不同來(lái)源的至少3份真實(shí)樣本，系列稀釋獲得多個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度重復(fù)檢測(cè)不少于3次，以100%可檢出的最低濃度水平作為預(yù)設(shè)檢測(cè)限。在此濃度附近制備若干濃度梯度樣品，每個(gè)濃度至少重復(fù)檢測(cè)20次，將具有95%以上陽(yáng)性檢出率的最低濃度作為最低檢測(cè)限。

2.6.2最低檢測(cè)限的驗(yàn)證

選擇與確定樣本不同的3份真實(shí)樣本，采用陰性樣本稀釋到最低檢測(cè)限濃度水平，重復(fù)檢測(cè)多次進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)達(dá)到95%以上陽(yáng)性檢出率。

2.7 分析特異性

2.7.1 交叉反應(yīng)

應(yīng)對(duì)戊型肝炎病毒的近緣微生物抗體，易引起相同或相似的臨床癥狀，及易合并感染的微生物抗體進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。如人類EB病毒（EBV）、巨細(xì)胞病毒（CMV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒（表面抗原/抗體、e抗原/抗體、核心抗體）、丙型肝炎病毒（HCV）等。同時(shí)進(jìn)行高濃度戊型肝炎病毒特異性IgG抗體和IgM抗體之間的交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

如果試劑原料采用基因重組抗原，則還需考慮對(duì)重組基因?qū)胛⑸锾禺愋钥贵w的交叉反應(yīng)評(píng)價(jià)。例如采用大腸埃希菌作為宿主菌進(jìn)行重組抗原的表達(dá)，建議考慮大腸埃希菌抗體陽(yáng)性樣本可能產(chǎn)生的交叉反應(yīng)。

交叉反應(yīng)用臨床樣本中相關(guān)病原體抗體滴度水平應(yīng)較高，并且抗體類型（IgM、IgG）應(yīng)與申報(bào)試劑檢測(cè)抗體類型一致。提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣本來(lái)源、陰陽(yáng)性和滴度確認(rèn)等信息。

2.7.2干擾試驗(yàn)

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，選擇適用的干擾物質(zhì)進(jìn)行研究。建議在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）下，采用待測(cè)抗體為弱陽(yáng)性和陰性水平的多例樣本進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)至少包括下列可能的干擾物質(zhì)。

2.7.2.1 內(nèi)源性干擾物質(zhì)：血紅蛋白、膽紅素、脂類、類風(fēng)濕因子、其他自身免疫性抗體，異嗜性抗體（如HAMA）、總IgG、總IgM、高濃度戊型肝炎病毒特異性IgG抗體與特異性IgM抗體。

2.7.2.2常見(jiàn)治療性藥物：不同種類的抗菌藥物、干擾素、常見(jiàn)的抗病毒藥物、癥狀相關(guān)其他經(jīng)驗(yàn)性藥物等。

2.7.2.3抗凝劑：如果試劑盒適用樣本類型包括血漿（全血）樣本，可采用一定數(shù)量同源樣本通過(guò)比對(duì)試驗(yàn)的方法，驗(yàn)證各種抗凝劑的適用性。

2.8 IgM抗體破壞試驗(yàn)

對(duì)于戊型肝炎病毒IgM抗體檢測(cè)試劑，建議對(duì)至少5份含有戊型肝炎病毒特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞實(shí)驗(yàn)研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2-巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進(jìn)行檢測(cè)，IgM檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。

2.9 鉤狀（HOOK）效應(yīng)

須采用多份高滴度樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度分別檢測(cè)，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)3～5次，對(duì)鉤狀效應(yīng)進(jìn)行研究。

2.10 其他需注意問(wèn)題

對(duì)于使用儀器進(jìn)行結(jié)果判讀的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說(shuō)明書【適用機(jī)型】項(xiàng)中所有型號(hào)儀器的性能評(píng)估資料。

2.11 反應(yīng)體系

反應(yīng)體系研究資料包括樣本的制備方式（采集和處理）、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、質(zhì)控方法、結(jié)果判讀方式等。

反應(yīng)條件確定：注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、判讀時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌液體積和洗滌次數(shù)（如涉及）等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測(cè)，注冊(cè)申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。對(duì)于IgM抗體檢測(cè)試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對(duì)結(jié)果的影響，合理設(shè)置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟（例如采用含有IgG吸附劑的樣本稀釋液等），或者詳述產(chǎn)品設(shè)計(jì)中關(guān)于避免IgG影響IgM檢測(cè)結(jié)果的合理措施，盡量減少特異性IgG對(duì)IgM檢測(cè)造成的假陰性和假陽(yáng)性。

3. 穩(wěn)定性研究

主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、開(kāi)瓶（開(kāi)封）穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性（如涉及）、機(jī)載穩(wěn)定性（如涉及）、運(yùn)輸穩(wěn)定性等研究。如果產(chǎn)品配套校準(zhǔn)品，還應(yīng)對(duì)校準(zhǔn)頻率進(jìn)行研究?？筛鶕?jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4. 陽(yáng)性判斷值研究

提交對(duì)申報(bào)試劑陰性/陽(yáng)性結(jié)果判斷的陽(yáng)性判斷值（cut-off）確定資料，包括具體的試驗(yàn)方案、人群及樣本選擇、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和研究數(shù)據(jù)等。建立陽(yáng)性判斷值的樣本選擇應(yīng)考慮不同的地理區(qū)域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素的影響，納入陰性、陽(yáng)性及臨界值附近的樣本。如檢測(cè)結(jié)果為數(shù)值形式，建議采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）的分析方式來(lái)確定合理的陽(yáng)性判斷值;如試驗(yàn)結(jié)果存在灰區(qū)（equivocal zone），應(yīng)提供灰區(qū)建立的依據(jù)。

如產(chǎn)品適用多個(gè)樣本類型，應(yīng)明確不同的樣本類型是否存在差異。如有差異，應(yīng)分別進(jìn)行陽(yáng)性判斷值的確定。

5. 其他資料

5.1主要原材料研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料一般包括抗原、抗體、對(duì)照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品和企業(yè)參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來(lái)源、制備過(guò)程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。如主要原材料為自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過(guò)程;如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對(duì)比篩選試驗(yàn)資料、供應(yīng)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料，供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。

5.1.1戊型肝炎病毒抗原

應(yīng)注重抗原表位的選擇，原材料研究資料中應(yīng)將此方面的考慮進(jìn)行詳述。詳細(xì)描述抗原的名稱，天然/重組表達(dá)信息及選擇該抗原的依據(jù)。提交抗原來(lái)源、生產(chǎn)商選擇、制備、純化、鑒定、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、功能性試驗(yàn)等）及檢驗(yàn)等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

5.1.2 抗人IgM/IgG抗體

詳述抗體的選擇過(guò)程，提交抗體生物學(xué)來(lái)源、免疫原及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價(jià)、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

5.1.3 質(zhì)控線/對(duì)照品/質(zhì)控品

免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品一般應(yīng)設(shè)置質(zhì)控線，詳述質(zhì)控線相關(guān)原材料（例如抗體）的來(lái)源、選擇依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

對(duì)照品/質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽(yáng)性兩個(gè)水平。陽(yáng)性對(duì)照品/質(zhì)控品可選擇經(jīng)合理稀釋的臨床陽(yáng)性樣本或人源化抗體，陰性對(duì)照品/質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或陰性基質(zhì)等。提交相關(guān)原料的來(lái)源、選擇和陰陽(yáng)性確認(rèn)等相關(guān)研究資料。應(yīng)對(duì)對(duì)照品/質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果做出明確的范圍要求。

5.1.4 其他主要原材料

除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他主要原材料，如膠體金、辣根過(guò)氧化物酶、吖啶酯、硝酸纖維素膜、微孔板、磁微粒、樣本稀釋液等，均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，并提交相關(guān)資料。明確主要原材料的供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應(yīng)介紹血細(xì)胞去除方式及相關(guān)原材料，并驗(yàn)證去除效果。

5.1.5 企業(yè)參考品

應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的實(shí)際情況，科學(xué)、合理的設(shè)定企業(yè)參考品。提交企業(yè)參考品的原料來(lái)源、選擇、制備、陰陽(yáng)性及濃度/滴度確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測(cè)樣本相同。企業(yè)參考品的設(shè)置應(yīng)至少包括：陽(yáng)性參考品、陰性參考品、檢測(cè)限參考品和重復(fù)性參考品。其中陽(yáng)性參考品重在評(píng)估產(chǎn)品的包容性，應(yīng)選擇不同來(lái)源的臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平。陰性參考品應(yīng)可評(píng)價(jià)產(chǎn)品的特異性，應(yīng)包含可能的干擾和交叉樣本，對(duì)于檢測(cè)戊型肝炎病毒IgM抗體的試劑，陰性參考品中建議包括戊型肝炎病毒IgG抗體陽(yáng)性樣本。檢測(cè)限參考品可設(shè)置臨床陽(yáng)性樣本的系列稀釋樣本，其中應(yīng)包含最低檢測(cè)限水平。重復(fù)性參考品可設(shè)置至少兩個(gè)水平的臨床陽(yáng)性樣本,包括最低檢測(cè)限附近濃度。對(duì)于同時(shí)檢測(cè)戊型肝炎病毒IgM和IgG抗體的試劑，企業(yè)參考品需對(duì)IgM抗體和IgG抗體分別設(shè)置。

5.2 生產(chǎn)工藝研究資料

5.2.1 產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

5.2.2 主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

5.2.3 包被/標(biāo)記工藝研究，應(yīng)考慮如包被/標(biāo)記液量、濃度、時(shí)間、PH值、標(biāo)記比率等指標(biāo)對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。

5.2.4 顯色系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。

（四）臨床試驗(yàn)

臨床試驗(yàn)的開(kāi)展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。

1.研究方法

該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)建議采用觀察性研究。臨床試驗(yàn)可采用試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品（對(duì)比試劑）進(jìn)行比較研究，評(píng)價(jià)兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性，評(píng)價(jià)指標(biāo)通常包括陽(yáng)性符合率、陰性符合率等。對(duì)比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測(cè)方法學(xué)、檢測(cè)性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)體外診斷試劑具有較好的可比性。

如試驗(yàn)體外診斷試劑在該類產(chǎn)品現(xiàn)有的臨床預(yù)期用途下，有新的臨床預(yù)期用途（如：定量檢測(cè)產(chǎn)品的治療效果監(jiān)測(cè)等），應(yīng)采用試驗(yàn)體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究，對(duì)產(chǎn)品新預(yù)期用途進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。臨床參考標(biāo)準(zhǔn)是指現(xiàn)有條件下臨床上可獲得的能夠用來(lái)確定受試者目標(biāo)狀態(tài)的最佳方法，通常來(lái)自臨床和實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)學(xué)實(shí)踐，包括患者跟蹤隨訪等。

如試驗(yàn)體外診斷試劑性能優(yōu)于已上市同類產(chǎn)品，如產(chǎn)品靈敏度顯著高于已上市同類產(chǎn)品，可將試驗(yàn)體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究和試驗(yàn)體外診斷試劑與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品的比較研究相結(jié)合，對(duì)產(chǎn)品的臨床性能進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，從而支持預(yù)期用途所聲稱的內(nèi)容。

2.受試者選擇及樣本收集

臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)體外診斷試劑的預(yù)期用途、目標(biāo)人群和檢測(cè)要求等合理確定臨床試驗(yàn)受試者的選擇要求和樣本收集方法，包括：受試者入組/排除標(biāo)準(zhǔn)等。

根據(jù)產(chǎn)品臨床試驗(yàn)的目的，應(yīng)入組戊型肝炎病毒感染的疑似人群，包含不同年齡段、不同性別人群。入組人群應(yīng)具有戊型病毒性肝炎的流行病學(xué)史或臨床表現(xiàn)，同時(shí)根據(jù)臨床確認(rèn)的需要，入組病例應(yīng)包括不同疾病分期（如：急性期、恢復(fù)期等）的患者。如試驗(yàn)體外診斷試劑聲稱可適用于“疾病監(jiān)測(cè)”，臨床試驗(yàn)應(yīng)入組符合要求的病例，進(jìn)行患者跟蹤隨訪研究。

臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類型應(yīng)為實(shí)際臨床檢測(cè)中常用的樣本類型。如試驗(yàn)體外診斷試劑所適用的不同樣本類型在樣本基質(zhì)、被測(cè)物來(lái)源、被測(cè)物濃度水平、干擾因素以及采樣部位等方面幾乎沒(méi)有差異，且經(jīng)臨床前研究證明分析性能沒(méi)有差異，例如某些檢測(cè)中的血清和血漿樣本，則臨床試驗(yàn)中不同樣本類型可進(jìn)行匯總統(tǒng)計(jì)。

3.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量和要求

該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)應(yīng)在不少于3家（含3家）符合要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展。申辦者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及其預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)戊型肝炎病毒流行情況等因素選擇具有代表性的機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)，包括受試人群的代表性等。

4.臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)

該類產(chǎn)品臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)主要包括試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽(yáng)性符合率、陰性符合率等。如試驗(yàn)體外診斷試劑與臨床參考方法進(jìn)行對(duì)比研究，其臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括臨床靈敏度、臨床特異度等。

5.臨床試驗(yàn)樣本量估算

適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC試驗(yàn)體外診斷試劑臨床性能得到準(zhǔn)確評(píng)價(jià)的必要條件。臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。

樣本量估算過(guò)程中需要考慮臨床試驗(yàn)中病例的剔除率，一般而言，病例剔除率不應(yīng)高于10%。

臨床試驗(yàn)樣本量除需滿足上述統(tǒng)計(jì)學(xué)估算的最低樣本量要求外，還應(yīng)保證入組受試者特征及分布符合預(yù)期適用人群。

6.統(tǒng)計(jì)分析

臨床試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)與臨床試驗(yàn)?zāi)康囊恢?，如臨床試驗(yàn)?zāi)康臑轵?yàn)證試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市產(chǎn)品的一致性，統(tǒng)計(jì)分析一般以2×2表的形式總結(jié)兩種分析方法的檢測(cè)結(jié)果，并據(jù)此計(jì)算陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其95%置信區(qū)間。

（五）產(chǎn)品說(shuō)明書

產(chǎn)品說(shuō)明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說(shuō)明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說(shuō)明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與注冊(cè)申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，戊型肝炎病毒IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑說(shuō)明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。

1.【預(yù)期用途】

1.1該產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)人××（如血清、血漿、全血等）樣本中的戊型肝炎病毒IgM/IgG抗體。

1.2結(jié)合臨床和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，用于戊型肝炎病毒感染的輔助診斷。

1.3臨床背景描述：簡(jiǎn)單介紹病原體的生物學(xué)特征、流行病學(xué)、潛伏期、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)及相關(guān)疾病等。簡(jiǎn)要介紹現(xiàn)有的戊型肝炎病毒臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

2.1樣本采集：明確采集時(shí)間、采集順序、采集量等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。說(shuō)明采集方法及樣本類型，對(duì)于血漿等樣本，應(yīng)注明對(duì)抗凝劑的要求。

2.2干擾物的影響：明確常見(jiàn)干擾物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。

2.3樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時(shí)限和運(yùn)輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測(cè)前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制等。

3.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟：

3.1實(shí)驗(yàn)環(huán)境：實(shí)驗(yàn)室的溫度、濕度要求，檢測(cè)試劑及樣本的復(fù)溫要求等。

3.2試劑配制方法，試劑開(kāi)封后使用方法等。

3.3高濃度樣本稀釋的方法。

3.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器波長(zhǎng)等。

3.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

3.6對(duì)于免疫層析法檢測(cè)試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗(yàn)操作方法、程序等。特別注意應(yīng)強(qiáng)調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時(shí)間。

3.7特別說(shuō)明檢驗(yàn)操作過(guò)程中的注意事項(xiàng)。

4.【陽(yáng)性判斷值】說(shuō)明陽(yáng)性判斷值，并簡(jiǎn)要說(shuō)明陽(yáng)性判斷值確定的試驗(yàn)方法。如陽(yáng)性判斷值需進(jìn)行計(jì)算確定，詳細(xì)描述具體計(jì)算方法。

5.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合質(zhì)控線/對(duì)照品/質(zhì)控品以及樣本的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。對(duì)于免疫層析法檢測(cè)試劑可采用圖示形式顯示檢測(cè)結(jié)果。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)以陽(yáng)性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療指南，則應(yīng)在此項(xiàng)下引用，相應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。如有灰區(qū)判定，詳細(xì)說(shuō)明灰區(qū)樣本的處理方法。

6.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測(cè)方法及適用范圍等信息，對(duì)可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說(shuō)明，建議包括以下內(nèi)容：

6.1本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果不得作為臨床診治的唯一依據(jù)，對(duì)患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

6.2不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、處理及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。

6.3感染初期，IgM抗體可能未產(chǎn)生或者產(chǎn)生水平低于產(chǎn)品最低檢測(cè)限，而產(chǎn)生陰性結(jié)果。檢測(cè)陰性不能排除急性感染，對(duì)于可疑的樣本建議進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)，或至少間隔7天再次檢測(cè)。

6.4在近幾個(gè)月內(nèi)接受過(guò)輸血或其他血液制品治療的人群，對(duì)其陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果的分析應(yīng)慎重。

6.5免疫功能受損人群或戊型肝炎慢性感染人群，其血清學(xué)抗體檢測(cè)的參考價(jià)值有限，可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋。

7.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：企業(yè)參考品符合率、最低檢測(cè)限、包容性、精密度、特異性（交叉反應(yīng)和干擾試驗(yàn)）、鉤狀（HOOK）效應(yīng)。介紹所用樣本背景信息、數(shù)量、濃度，評(píng)價(jià)方法及檢測(cè)結(jié)果。

8.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

8.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)對(duì)照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過(guò)了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項(xiàng)目的檢測(cè)，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。

8.2有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。

三、參考文獻(xiàn)

[1]體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法[Z]（國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局令第48號(hào)）.

[2]體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則[Z]（國(guó)家藥監(jiān)局2021年第72號(hào)公告）.

[3]體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則[Z]（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第17號(hào)）.

[4]關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告[Z]（國(guó)家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號(hào)）.

[5]戊型病毒性肝炎診療規(guī)范.中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)感染科醫(yī)師分會(huì).中華臨床感染病雜志, 2009.

[6]戊型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部, 2008.