隱球菌莢膜多糖抗原檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2021年第4號）

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隱球菌莢膜多糖抗原檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則
（2021年第4號）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對隱球菌莢膜多糖抗原檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對隱球菌莢膜多糖抗原檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

隱球菌病是一種由隱球菌感染引起的深部真菌病，可累及全身多個系統(tǒng)。隱球菌屬內(nèi)對人致病的最主要病原菌是新生隱球菌（Cryptococcus neoformans）和格特隱球菌（Cryptococcus gattii）。根據(jù)新生隱球菌莢膜多糖成分和生化方面的差異，將新生隱球菌分成2個變種（新生隱球菌新生變種C.neoformans var.neoformans和新生隱球菌格魯比變種C.neoformans var.grubii），按血清學(xué)分為A、B、C、D和AD型5個型。其中新生變種為血清D、AD型，歐洲、南美洲流行;格魯比變種為血清A型，全球流行;格特隱球菌為血清B、C型，在熱帶亞熱帶溫帶流行;我國血清型主要為A型。此外，還發(fā)現(xiàn)了新生變種與格魯比變種的雜合體（血清型AD）。隱球菌的基因型包括新生隱球菌的VNⅠ、Ⅱ、Ⅳ、B和格特隱球菌的VGI-VGIV。兩種隱球菌的無性繁殖體均為無菌絲的單芽孢酵母菌,在體外為無莢膜或僅有小莢膜，進(jìn)入人體內(nèi)后很快形成厚莢膜，有莢膜的隱球菌菌體直徑明顯增加,致病力明顯增強(qiáng)。隱球菌莢膜的主要成分莢膜多糖是確定血清型特異性的抗原基礎(chǔ)，并與其毒力、致病性及免疫性密切相關(guān)。隱球菌是一種機(jī)會感染性真菌，既可侵犯免疫力低下及免疫缺陷人群，也可發(fā)生于免疫正常者，可以感染人體的任何組織和臟器，最常見的部位是中樞神經(jīng)系統(tǒng)，其次是肺部和皮膚。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)隱球菌感染通常表現(xiàn)為腦膜炎或腦膜腦炎，極少數(shù)表現(xiàn)為單個或多個局灶性腫塊損害（隱球菌肉芽腫），中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染可伴發(fā)肺部或其他播散性感染，但大多數(shù)不伴有其他感染的臨床表現(xiàn)。隱球菌感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)外的器官和部位，肺和皮膚是常見的兩個部位。肺是隱球菌感染的主要門戶，肺隱球菌感染的臨床表現(xiàn)多種多樣，可從無癥狀的結(jié)節(jié)到嚴(yán)重的急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）。皮膚隱球菌感染根據(jù)感染來源，可以分為原發(fā)性和繼發(fā)性感染兩種。繼發(fā)性隱球菌感染一般預(yù)示已經(jīng)發(fā)生播散性隱球菌感染，主要來源于血行播散，提示感染嚴(yán)重。

隱球菌感染的病原學(xué)及實驗室檢測包括隱球菌的微生物學(xué)鑒定，隱球菌病的免疫學(xué)診斷（血清學(xué)實驗），隱球菌的藥物敏感試驗和隱球菌病的組織病理學(xué)。其中隱球菌病的免疫學(xué)診斷（血清學(xué)實驗）臨床上常用的為隱球菌莢膜多糖抗原檢測，其方法有乳膠凝集試驗（Latex Agglutination test ，LA）、酶聯(lián)免疫分析法（Enzyme Immunoassay ，EIA）及側(cè)向免疫層析法（Lateral Flow Immunoassay ，LFA）等。隱球菌莢膜多糖抗原檢測可輔助診斷隱球菌感染，隱球菌莢膜多糖抗原陽性提示隱球菌感染，腦脊液中隱球菌莢膜多糖抗原滴度的高低可提示疾病的嚴(yán)重程度。隱球菌莢膜多糖抗原檢測因其簡單、快速已經(jīng)是目前國內(nèi)臨床輔助診斷隱球菌感染最常用的方法之一。

本指導(dǎo)原則適用于利用酶聯(lián)免疫法、乳膠凝集試驗和側(cè)向免疫層析法等基于抗原抗體反應(yīng)原理，對來源于血清和/或血漿和/或全血和/或腦脊液等人體樣本中的隱球菌莢膜多糖抗原進(jìn)行體外定性檢測的試劑。結(jié)合臨床和其他實驗室指標(biāo)，可用于隱球菌感染的輔助診斷。如涉及半定量檢測試劑，或待測樣本類型為血清、血漿、全血、腦脊液外其他樣本類型（如尿液、肺泡灌洗液），應(yīng)對半定量或其他樣本類型的性能進(jìn)行研究，并根據(jù)申請的預(yù)期用途設(shè)計臨床試驗進(jìn)行驗證。可適量參考本指導(dǎo)原則相關(guān)要求。

本指導(dǎo)原則僅包括對隱球菌莢膜多糖抗原檢測試劑申報資料中部分項目的要求，適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）、《體外診斷試劑注冊申報資料基本要求》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）等相關(guān)法規(guī)和文件的要求。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品預(yù)期用途

詳述檢測試劑的預(yù)期用途，包括預(yù)期人群、適用的樣本類型，檢測結(jié)果的臨床指導(dǎo)意義等。描述隱球菌的生物學(xué)特征、隱球菌感染疾病相關(guān)流行病學(xué)、潛伏期、易感人群、臨床表現(xiàn)等。說明現(xiàn)有的臨床或其他實驗室診斷方法等。

2.同類產(chǎn)品上市情況

應(yīng)著重從技術(shù)方法及預(yù)期用途（包括預(yù)期人群、樣本類型、臨床意義）等方面寫明擬申報產(chǎn)品與現(xiàn)行臨床診斷方法，以及目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要異同點。

（二）主要原材料研究資料

此產(chǎn)品的主要原材料包括抗體、質(zhì)控品（如適用）以及企業(yè)參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等研究資料。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)明確原材料的制備原理，簡述制備過程及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料為外購，應(yīng)提供的資料包括：原材料的篩選研究資料、供應(yīng)商選擇的研究資料、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、供應(yīng)商出具的主要原材料檢驗報告（質(zhì)量證書）和入廠檢驗報告等。供應(yīng)商為原材料的生產(chǎn)商，不得隨意更換。

主要原材料的篩選研究資料，應(yīng)包含試驗方法、實驗數(shù)據(jù)及分析。質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括相應(yīng)試驗方法及原材料應(yīng)達(dá)到的客觀評價標(biāo)準(zhǔn)。人源或其他生物源性原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中還應(yīng)包含生物安全指標(biāo)。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)依據(jù)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對原材料進(jìn)行檢驗，檢驗合格方可用于生產(chǎn)。

1.抗體

應(yīng)明確抗體名稱、生物學(xué)來源、免疫原、供應(yīng)商名稱、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（一般包括外觀、蛋白純度、濃度、效價、分子量、功能性試驗）等。

如為自制抗體，還需明確抗體所針對的抗原表位、免疫原的具體信息，包括天然抗原的來源、重組或人工合成抗原的序列信息及制備方法。同時提交抗體制備、篩選、鑒定等詳細(xì)試驗資料。

2.其他主要原輔料

包括基于酶聯(lián)免疫技術(shù)的固相載體，如酶標(biāo)板、微粒等；基于凝集反應(yīng)的乳膠顆粒等；基于側(cè)向免疫層析技術(shù)的金顆粒、硝酸纖維素膜等。申請人應(yīng)提交上述原材料的選擇依據(jù)及驗證資料，明確供應(yīng)商名稱及原材料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3.試劑盒質(zhì)控品（如有）

應(yīng)包括原料來源、質(zhì)控品制備、陰陽性確認(rèn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽性兩個水平。陽性質(zhì)控品可選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株或經(jīng)鑒定、可溯源的臨床分離株或莢膜多糖抗原。如莢膜多糖抗原為企業(yè)自制，請詳述制備的方法。提交質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中各項指標(biāo)，如濃度、純度測定的方法及結(jié)果。

4.企業(yè)參考品（如適用）

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)等相關(guān)驗證資料。說明參考品陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)的方法或試劑（建議采用國內(nèi)已上市的、臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑）。參考品可采用臨床真實樣本，亦可采用標(biāo)準(zhǔn)菌株或臨床分離株添加入待測樣本基質(zhì)的形式制備。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測樣本相同,需涵蓋所有待測樣本基質(zhì)。企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：

4.1陽性參考品

陽性參考品應(yīng)考慮覆蓋不同種及不同型別的隱球菌感染樣本。建議包含隱球菌A、B、C、D和AD血清型，或新生隱球菌VNⅠ、Ⅱ、Ⅳ、B基因型和格特隱球菌VGI-VGIV基因型。參考品應(yīng)設(shè)置不同濃度水平。

4.2陰性參考品

陰性參考品應(yīng)考慮檢測特異性的評價，納入正常臨床樣本、含類風(fēng)濕因子等干擾因素的樣本及其他病原體陽性樣本，可選擇多個病原體標(biāo)準(zhǔn)菌株或臨床分離株，包含常見真菌（見表1）。

4.3檢測限參考品

可設(shè)置不同滴度的臨床陽性樣本或莢膜多糖抗原或臨床陽性樣本的系列梯度濃度樣本，樣本基質(zhì)與檢測樣本一致，其中應(yīng)包含檢測限水平。

4.4精密度參考品

建議至少包含中陽性和弱陽性，至少兩個濃度水平的參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

2.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

3.膠體金的制備及金顆粒大小確定的研究（如適用）。

4.包被/標(biāo)記工藝研究，申請人應(yīng)考慮，包被/標(biāo)記液量、pH值、濃度、時間等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過實驗確定上述指標(biāo)的最佳組合。

5.膜干燥工藝的確定，申請人應(yīng)對不同干燥條件（時間、溫度）下的試劑性能及穩(wěn)定性進(jìn)行研究。（如適用）

6.反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過實驗確定上述條件的最佳組合。

7.反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過實驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過實驗確定最終選擇的用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法。

8.顯色系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。（如適用）

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行性能評估研究。對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體研究目的、實驗方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、使用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源、研究用樣本性質(zhì)和濃度確定的方法等。

分析性能評價的實驗方法可以參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。對于此類產(chǎn)品，性能評估中所用樣品（除非特別說明）可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。各項性能評價應(yīng)符合以下要求。

1.適用的樣本類型

如果申報試劑適用于多種樣本類型，應(yīng)采用合理方法評價每個樣本類型的適用性。對于可比樣本，可采用同源比對的方法進(jìn)行驗證；對于不可比樣本，應(yīng)對每個樣本類型分別進(jìn)行性能評估，至少包括精密度、干擾試驗、最低檢出限和包容性。此處所述可比樣本，一般指：性能指標(biāo)相同、陽性判斷值相同、預(yù)期人群一致、臨床意義相同。反之，則應(yīng)視為不可比樣本。

2.準(zhǔn)確度

申請人可選擇下述兩種方式或兩種方式之一進(jìn)行準(zhǔn)確度研究。

2.1方法學(xué)比對

采用對系列樣本檢測的方式，比較檢測結(jié)果與臨床診斷結(jié)果或已上市試劑檢測結(jié)果之間的差異。

樣本應(yīng)選擇預(yù)期人群的樣本，并注意包含不同水平的隱球菌莢膜多糖抗原及隱球菌的不同型別，且包含干擾及交叉樣本。

2.2企業(yè)內(nèi)部參考品檢測

通過檢測企業(yè)內(nèi)部陰、陽性參考品，評價申報試劑的檢測準(zhǔn)確性。

3.最低檢測限（分析靈敏度）

3.1最低檢測限的建立

建議采用對來自不同型別隱球菌的，已知濃度的莢膜多糖抗原樣本，進(jìn)行系列稀釋后重復(fù)檢測的方法，確定申報試劑的檢出限。稀釋時應(yīng)注意采用待測樣本類型進(jìn)行稀釋。在上述重復(fù)檢測過程中，記錄不同稀釋度/濃度檢出（或陽性）的結(jié)果。采用適當(dāng)?shù)哪Ｐ?，計算申報試劑在設(shè)定概率下的檢出限，一般在該檢測濃度下應(yīng)具有95%的可能性檢出。

3.2最低檢測限的驗證

申報試劑應(yīng)在檢測限濃度水平對來自不同型別隱球菌的隱球菌莢膜多糖抗原的檢出進(jìn)行驗證。一般采用對檢出限濃度水平樣本進(jìn)行至少20次的重復(fù)試驗的方法對檢出限進(jìn)行驗證。

4.包容性

應(yīng)證明申報試劑具有檢出不同型別隱球菌中莢膜多糖抗原的能力。不同型別包括：我國有報道的隱球菌感染種類，如新生隱球菌和格特隱球菌的五個血清型別或基因型為新生隱球菌VNⅠ、Ⅱ、Ⅳ、B和格特隱球菌的VGI-VGIV；其他隱球菌屬，如淺白隱球菌C. albidus、土生隱球菌C. humicola。應(yīng)采用略高于檢出限濃度的各型別樣本進(jìn)行重復(fù)檢測研究。該樣本可以為滅活的臨床樣本或標(biāo)準(zhǔn)菌株。

5.分析特異性

5.1交叉反應(yīng)

用于隱球菌莢膜多糖抗原交叉反應(yīng)驗證的病原體種類主要考慮以下幾方面：抗原結(jié)構(gòu)具有同源性（如隱球菌在真菌分類學(xué)上的近緣菌）、易引起相同或相似的臨床癥狀、采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他病原體，具體目錄參見表1。

建議選擇高濃度交叉反應(yīng)物水平進(jìn)行驗證，細(xì)菌或者真菌的最低濃度為106 CFU/mL。對于交叉反應(yīng)中病原體的最低濃度，申請人也可根據(jù)病原體的具體特性規(guī)定相應(yīng)濃度及濃度單位。臨床收集的樣本應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗證的病原體的來源、種屬和濃度信息，標(biāo)準(zhǔn)菌株還應(yīng)同時提供制備方法。

5.2干擾物質(zhì)

5.2.1內(nèi)源性及外源性干擾

干擾物質(zhì)包括內(nèi)源性干擾物質(zhì)和外源性藥物。內(nèi)源性干擾物質(zhì)應(yīng)至少包括：血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯（血清/血漿/全血適用）、類風(fēng)濕因子、自身抗體等；外源性藥物應(yīng)包含表2中內(nèi)容。

建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（最差條件）對包含隱球菌莢膜多糖抗原弱陽性在內(nèi)的至少兩個濃度水平的臨床樣本進(jìn)行干擾影響研究。對于常見藥物干擾試驗，建議參照相應(yīng)藥物藥代動力學(xué)研究確定的治療藥物濃度添加相應(yīng)藥物進(jìn)行干擾驗證。

5.2.2抗凝劑的干擾

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿和/或全血樣本，可采用一定數(shù)量血清、血漿、全血同源樣本進(jìn)行對比試驗的方法，或采用回收試驗的方法，驗證各種抗凝劑的適用性。

6.精密度

申請人應(yīng)對每項精密度指標(biāo)的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如變異系數(shù)的范圍和顯色強(qiáng)度等。研究資料應(yīng)包括時間、地點、操作人員、檢測次數(shù)、所用試劑批次、樣本濃度、適用儀器（如適用）、研究過程以及結(jié)果分析方法等。應(yīng)考慮以下幾個方面：

6.1對可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗證：除申報試劑本身外，還應(yīng)對不同時間、地點、不同儀器（如適用）、操作人員、測試運(yùn)行間的差異進(jìn)行相關(guān)的驗證。

6.2設(shè)定合理的精密度評價周期。

6.3應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行精密度研究。

6.4研究樣本應(yīng)至少包括四個水平，具體要求如下：

6.4.1陰性樣本：不含待測靶物質(zhì)的樣本，全部為陰性。

6.4.2高值陰性樣本（如C5）：濃度略低于最低檢測限，陰性率應(yīng)≥95%（n≥20）。

6.4.3臨界陽性樣本：陽性檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）。

6.4.4中等強(qiáng)度陽性樣本：陽性檢出率應(yīng)為100%，CV結(jié)果應(yīng)在合理的可接受范圍內(nèi)（如適用）。（n≥20）。

7.鉤狀（HOOK）效應(yīng)

建議采用高濃度的隱球菌莢膜多糖抗原樣本進(jìn)行梯度稀釋后分別檢測，每個梯度重復(fù)3至5次，將顯色深度或檢測值隨濃度升高反而變淺或降低時的濃度，作為不出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時隱球菌莢膜多糖抗原最高濃度。

（五）陽性判斷值確定資料

申請人應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，如受試者工作特征曲線（ROC）的分析方式，來確定合理的陽性判斷值。若試驗結(jié)果存在灰區(qū)，則應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。試驗所用樣本來源應(yīng)考慮到地域、年齡、職業(yè)、是否接受抗菌治療等因素的影響。如果申報產(chǎn)品包含不可比的樣本類型，如血清和腦脊液，請分別對兩種樣本類型進(jìn)行陽性判斷值的確定和驗證。

申請人應(yīng)提交具體的試驗方案、評價標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計學(xué)分析、研究數(shù)據(jù)等研究資料。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶/開封穩(wěn)定性（如涉及）及凍融穩(wěn)定性（如涉及）等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。運(yùn)輸穩(wěn)定性的研究，注意包含詳盡的運(yùn)輸條件描述、運(yùn)輸過程中的實時監(jiān)控數(shù)據(jù)，并包含至少一批試劑，運(yùn)輸后至效期的驗證資料。

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實際運(yùn)輸及儲存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗證，以確認(rèn)樣本的保存條件及時限（短期、長期）。需要冷凍保存的樣本同時應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗證。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床評價資料

臨床試驗的開展應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)、文件的要求。臨床試驗資料應(yīng)符合《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）要求。

1.樣本類型

對于樣本類型為腦脊液的產(chǎn)品，其預(yù)期用途一般用于隱球菌性腦膜炎的輔助診斷。

對于樣本類型為血清的產(chǎn)品，其預(yù)期用途一般用于隱球菌?。òǚ?、中樞神經(jīng)系統(tǒng)或皮膚等隱球菌各部位感染）的輔助診斷。

當(dāng)申報樣本類型還包括血漿或全血時，應(yīng)通過與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究或同源樣本比對的方法確認(rèn)臨床性能。

2.受試人群

對于腦脊液樣本類型，受試人群應(yīng)為疑似隱球菌性腦膜炎患者，應(yīng)包括免疫功能正常人群和免疫功能低下人群。

對于血清樣本類型，受試人群應(yīng)為疑似隱球菌病患者（包括肺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)或皮膚等各部位疑似隱球菌感染的患者），應(yīng)包括免疫功能正常人群和免疫功能低下人群。

應(yīng)考慮流行病學(xué)特征，納入不同地區(qū)的患者/人群，以驗證本產(chǎn)品的臨床性能。

為考察產(chǎn)品的臨床特異性，應(yīng)適當(dāng)納入干擾和易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的樣本。針對血清樣本類型，建議納入部分類風(fēng)濕因子陽性患者樣本、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者樣本以及毛孢子菌屬感染患者樣本。針對腦脊液樣本類型，建議納入部分細(xì)菌性腦膜炎（革蘭陽性、革蘭陰性分別應(yīng)有納入）患者樣本，結(jié)核性腦膜炎患者樣本，病毒性腦膜炎樣本以及自身免疫性腦炎患者樣本。

臨床試驗應(yīng)包含一定數(shù)量的新鮮樣本。凍存樣本和新鮮樣本的檢測結(jié)果如有差異應(yīng)分別統(tǒng)計。

3.對比方法

對于腦脊液樣本類型，可選擇已上市同類產(chǎn)品或臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行盲法同步比較，驗證試驗用體外診斷試劑的臨床性能。

對于血清樣本類型，可選擇已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗或采用試驗用體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行盲法同步比較，驗證試驗用體外診斷試劑的臨床性能。

對于肺隱球菌感染的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)包括：組織病理檢查，無菌部位標(biāo)本病原學(xué)涂片和培養(yǎng)。對于隱球菌性腦膜炎的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)包括：腦脊液病原學(xué)涂片和培養(yǎng)，腦脊液隱球菌莢膜多糖抗原檢測。

4.樣本量

適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC申報產(chǎn)品臨床性能得到準(zhǔn)確評價的必要條件。臨床試驗樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行估算。

4.1 采用已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對研究：隱球菌抗原檢測試劑為定性檢測產(chǎn)品，如臨床試驗采用申報產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對的試驗設(shè)計，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評價指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為試驗用體外診斷試劑評價指標(biāo)預(yù)期值。

對于腦脊液樣本，樣本量估算過程中，建議評價指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）即隱球菌抗原試劑臨床陰/陽性符合率大于95%。

4.2 對于血清樣本類型，如采用臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比對研究，建議對樣本量進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)估算，隱球菌性腦膜炎患者樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。隱球菌性腦膜炎樣本量估算過程中，建議評價指標(biāo)的靈敏度特異度臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）大于95%。

建議納入不少于30例肺隱球菌感染確診病例，并適量納入除中樞神經(jīng)系統(tǒng)和肺以外其他部位隱球菌感染患者。

樣本量估算過程中需要考慮臨床試驗中病例的剔除率，一般而言，病例剔除率不應(yīng)高于10%。

臨床試驗樣本量除需滿足上述統(tǒng)計學(xué)估算的最低樣本量要求外，還應(yīng)保證入組病例覆蓋受試者的各種特征。如臨床試驗研究有更合理的樣本量估算方式，在說明其合理性后亦可采用。

5.試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的對比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。

試驗方案中應(yīng)確定病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。應(yīng)對檢測樣本的類型和數(shù)量提出要求。應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，如評價試驗用體外診斷試劑與對比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)，并提出適合的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法。

臨床試驗中如有體外診斷試劑與對比方法檢測結(jié)果不一致的情況，應(yīng)對不一致結(jié)果進(jìn)行綜合分析，說明是否影響對產(chǎn)品臨床性能的判定；對檢測結(jié)果不一致樣本可采用臨床參考標(biāo)準(zhǔn)或其他恰當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行確認(rèn)，但該確認(rèn)結(jié)果不應(yīng)納入原有統(tǒng)計分析。

6.統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法對臨床試驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。對于此類定性檢測試劑與已上市同類產(chǎn)品或參比方法的比較研究試驗，常選擇配對四格（2×2）表或列聯(lián)表的形式總結(jié)試驗用體外診斷試劑與對比試劑/參比方法的檢測結(jié)果，計算陽性符合率、陰性符合率、總符合率以及95%置信區(qū)間，kappa值等指標(biāo)。

對于血清樣本類型與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)對比的分析，統(tǒng)計分析常選擇四格（2×2）表形式對結(jié)果進(jìn)行總結(jié)，并據(jù)此計算申報產(chǎn)品臨床靈敏度和特異度及其置信區(qū)間。對于肺隱球菌感染，隱球菌性腦膜炎和其他類型隱球菌感染患者需進(jìn)行分層統(tǒng)計。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。

隱球菌莢膜多糖抗原檢測試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陰/陽性參考品符合率、精密度、最低檢測限等。陽性參考品主要考察對隱球菌莢膜多糖抗原的陽性檢出能力，陰性參考品則重點對分析特異性進(jìn)行驗證。

如果申報試劑已有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布，則申請人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢驗要求。

按照《辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。在附錄中列明本指導(dǎo)原則“主要原材料研究資料”中提及的所有適用原材料的要求。

（九）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對隱球菌莢膜多糖抗原檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1．【預(yù)期用途】

1.1對于樣本類型為腦脊液的產(chǎn)品，試劑盒用于體外定性檢測人腦脊液中隱球菌莢膜多糖抗原，用于隱球菌性腦膜炎的輔助診斷。

對于樣本類型為血清或/和血漿或/和全血的產(chǎn)品，試劑盒用于體外定性檢測人血清或/和血漿或/和全血樣本中隱球菌莢膜多糖抗原，用于隱球菌病的輔助診斷。

1.2結(jié)合臨床和其他實驗室指標(biāo)，明確檢測的臨床意義。

1.3臨床背景描述：簡單介紹病原體的生物學(xué)特征、流行病學(xué)、潛伏期、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)及相關(guān)疾病等。簡要介紹現(xiàn)有隱球菌感染的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，質(zhì)控品應(yīng)明確具體基質(zhì)成分和濃度水平。對于膠體金試劑應(yīng)描述試劑條/卡結(jié)構(gòu)組成及檢測試劑包含的稀釋液等組分。

2.2介紹檢測中使用的抗體信息及標(biāo)記物信息，包括抗體的動物源性、抗體的性質(zhì)（單克隆或多克?。?、標(biāo)記物種類等。

2.3試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、注冊證號/備案號（如有）、貨號、生產(chǎn)商等其他相關(guān)信息。

3.【儲存條件及有效期】

詳細(xì)介紹試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶/開封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等信息。

對于基于側(cè)向免疫層析技術(shù)的檢測試劑，開封穩(wěn)定性應(yīng)同時注明，開封條件：包括濕度和溫度。對于酶免疫技術(shù)的檢測試劑，應(yīng)至少注明試劑盒內(nèi)質(zhì)控品和校準(zhǔn)品（如適用）的開瓶穩(wěn)定性。

運(yùn)輸穩(wěn)定性的描述，應(yīng)基于研究資料，客觀描述運(yùn)輸條件、運(yùn)輸過程中的溫度范圍、運(yùn)輸時限、開箱溫度等內(nèi)容。

4.【適用機(jī)型】（如適用）

對于采用酶聯(lián)免疫吸附法的檢測試劑應(yīng)明確適用酶標(biāo)儀的波長要求，其他方法學(xué)檢測試劑應(yīng)明確具體的適用機(jī)型型號。

5.【樣本要求】重點明確以下內(nèi)容

5.1樣本的采集：明確推薦的采集時間、采集順序、采集量等，樣本的取材及處理方式等，若有通用的技術(shù)規(guī)范或指南，則應(yīng)遵循，并在此處引用。

5.2樣本類型：明確樣本類型，對于血漿/全血樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。

5.3樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時限和運(yùn)輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制等。

6.【檢驗方法】

詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟：

6.1實驗環(huán)境：實驗室的溫度、濕度要求。

6.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。

6.3高濃度樣本稀釋的方法。

6.4試驗條件：操作步驟、溫度、時間、儀器波長等。

6.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

6.6對于膠體金法檢測試劑可以彩圖圖示形式顯示正確的檢驗操作方法、程序及注意事項等。特別注意應(yīng)強(qiáng)調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時間。

6.7特別說明檢驗操作過程中的注意事項。

7.【檢驗結(jié)果的解釋】

詳細(xì)描述檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)或計算方法，如有灰區(qū)判定，應(yīng)詳細(xì)說明灰區(qū)樣本的處理方法。

基于側(cè)向免疫層析技術(shù)的檢測試劑，應(yīng)以彩圖的形式顯示結(jié)果的判讀方法。

檢驗結(jié)果的解釋應(yīng)結(jié)合相應(yīng)的臨床診療指南進(jìn)行描述。

8.【檢驗方法局限性】

列明假陰性和假陽性結(jié)果出現(xiàn)的可能情形。

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明。

9.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：

9.1對相應(yīng)國家參考品（如有）檢測的符合情況。

9.2準(zhǔn)確性：簡述研究用樣本性質(zhì)、例數(shù)和評價結(jié)果。

9.3 最低檢測限和包容性：簡要介紹評價方法、所用隱球菌菌株或樣本情況以及評價結(jié)果。

9.4分析特異性

9.4.1交叉反應(yīng)：簡述交叉反應(yīng)驗證的病原體種類，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。

9.4.2干擾物質(zhì)：簡述評價的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。

9.5精密度：簡述試驗方法及各項精密度研究結(jié)果。

9.6鉤狀（HOOK）效應(yīng)：對高濃度莢膜多糖抗原鉤狀效應(yīng)的驗證情況進(jìn)行總結(jié)。

10.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

10.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)對照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項目的檢測，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

10.2試驗室應(yīng)具有Ⅱ級生物安全防護(hù)能力。

10.3有關(guān)實驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。

三、參考文獻(xiàn)

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3.《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）.2014年9月

4.《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）.2014年9月

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四、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。