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人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測(cè)及基因分型、試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則(2015年第93號(hào))

發(fā)布日期:2015-11-26 閱讀量:

附件:人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測(cè)及基因分型、試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則(2015年第93號(hào)).doc

人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測(cè)及基因分型、試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則(2015年第93號(hào))(圖1)

人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測(cè)及基因分型、試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測(cè)及基因分型試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫,同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是針對(duì)人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測(cè)及基因分型試劑的一般要求,申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用,若不適用,需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù),并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件,不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng),亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行,如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法,也可以采用,但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的,隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus, HPV)屬于乳頭瘤病毒科,是一種小分子的、無被膜包被的1、環(huán)狀雙鏈DNA病毒,基因組長(zhǎng)約8000堿基對(duì)(bp),分為3個(gè)功能區(qū),即早期轉(zhuǎn)錄區(qū)(E區(qū))、晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)(L區(qū))和非轉(zhuǎn)錄區(qū)(長(zhǎng)控制區(qū),LCR)。HPV通過直接或間接接觸污染物品或性傳播感染人類。該病毒不但具有宿主特異性,而且具有組織特異性,只能感染人的皮膚和粘膜上皮細(xì)胞,引起人類皮膚的多種乳頭狀瘤或疣及生殖道上皮增生性損傷。

對(duì)于感染生殖道和肛門的HPV,根據(jù)各基因型別致病力大小或致癌危險(xiǎn)性大小可分為低危型和高危型兩大類。在有性生活史的女性中生殖道HPV感染具有普遍性,據(jù)統(tǒng)計(jì)70%~80%的女性在其一生中會(huì)有至少一次的HPV感染,但大多數(shù)感染為自限性,超過90%的感染的女性會(huì)出現(xiàn)一種有效的免疫應(yīng)答,在沒有任何長(zhǎng)期的健康干預(yù)時(shí)在6到24個(gè)月之間可以清除感染。而持續(xù)性的高危型HPV感染則是導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的主要原因。全球范圍的研究結(jié)果顯示,在99.7%的宮頸癌患者體內(nèi)檢測(cè)到高危型HPV DNA的存在,其中HPV16型、18型、45型和31型感染占80%。低危型HPV一般與尖銳濕疣或低度鱗狀上皮內(nèi)病變相關(guān),極少引起浸潤(rùn)癌。關(guān)于高危型與低危型的劃分,國(guó)際上許多機(jī)構(gòu)都給出了參考建議,依據(jù)WHO國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)及其他國(guó)際組織的研究成果,本指導(dǎo)原則建議將HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等13種基因型列為高危型別,26、53、66、73、82等5種基因型列為中等風(fēng)險(xiǎn)型別,本指導(dǎo)原則中所述的檢測(cè)試劑及其要求均只針對(duì)用于宮頸癌相關(guān)預(yù)期用途的(上述18種)HPV基因型核酸檢測(cè),如申報(bào)的宮頸癌相關(guān)HPV核酸檢測(cè)產(chǎn)品涉及上述18種型別以外的其他HPV基因型,則申請(qǐng)人需提出明確的理由和依據(jù),且應(yīng)得到國(guó)際有關(guān)權(quán)威機(jī)構(gòu)的文獻(xiàn)支持。下文中述及“高危型”均泛指此18種HPV基因型。

多年來,國(guó)際上通用的宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的診斷主要遵循“三階梯式”診斷程序,即宮頸細(xì)胞學(xué)、陰道鏡及組織病理學(xué)檢查。宮頸細(xì)胞學(xué)檢查是普遍應(yīng)用的宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的篩查方法,可發(fā)現(xiàn)早期病變。但宮頸細(xì)胞學(xué)檢查存在其固有的局限性。高危型HPV檢測(cè)用于宮頸細(xì)胞學(xué)檢查異?;颊叩姆至骷皩m頸癌篩查,可有效地增加宮頸病變檢出率,提高細(xì)胞學(xué)檢查敏感性,并降低篩查頻率。

本文所述人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測(cè)及基因分型試劑是指利用包括PCR-熒光探針法或其他分子生物學(xué)方法在內(nèi)的核酸檢測(cè)技術(shù),以特定高危型HPV核酸(包括DNA和RNA)序列為檢測(cè)目的,對(duì)人宮頸樣本(如人宮頸脫落上皮細(xì)胞或分泌物等)進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑,以確定受試樣本中是否存在高于陽(yáng)性判斷值水平的高危型HPV病毒,或同時(shí)鑒定感染HPV的基因型別。此類試劑在臨床上用于:1)篩查宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為ASC-US(意義未確定的非典型鱗狀上皮細(xì)胞)結(jié)果的患者,以確定是否需要進(jìn)行陰道鏡檢查(以下簡(jiǎn)稱ASC-US人群分流用途);2)對(duì)于30歲及以上的女性,通過檢測(cè)是否有高危型HPV感染,與宮頸細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合進(jìn)行宮頸癌篩查,此檢測(cè)結(jié)合細(xì)胞學(xué)病史和其他風(fēng)險(xiǎn)因素的評(píng)估、以及臨床診療和篩查指南的要求,用于指導(dǎo)患者的管理(以下簡(jiǎn)稱宮頸癌聯(lián)合篩查用途);3)對(duì)于某年齡段(根據(jù)臨床試驗(yàn)結(jié)果而定)女性,通過檢測(cè)是否有高危型HPV感染,進(jìn)行宮頸癌篩查,此檢測(cè)結(jié)合細(xì)胞學(xué)病史和其他風(fēng)險(xiǎn)因素的評(píng)估、以及臨床診療和篩查指南的要求,用于指導(dǎo)患者的管理(以下簡(jiǎn)稱宮頸癌初篩用途)。除此以外,若申請(qǐng)人提出其他的預(yù)期用途,則應(yīng)詳細(xì)描述相關(guān)的臨床背景信息和該檢測(cè)與臨床用途的相關(guān)性,并在臨床試驗(yàn)中充分驗(yàn)證相關(guān)的臨床意義。本指導(dǎo)原則僅針對(duì)上述三種預(yù)期用途提出相關(guān)要求。

這里所述的HPV核酸檢測(cè)試劑是指可同時(shí)檢測(cè)多種基因型HPV但不能對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行基因分型的試劑,HPV基因分型試劑是指檢測(cè)多種基因型HPV的同時(shí)可以對(duì)HPV陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行基因分型的試劑。

關(guān)于本指導(dǎo)原則所述產(chǎn)品的預(yù)期用途還有以下幾點(diǎn)需要強(qiáng)調(diào)。第一,在年齡<30歲的女性中,雖然HPV感染率很高,但其自主清除率也很高,因此對(duì)于細(xì)胞學(xué)檢查正常的受試者不建議再采用HPV檢測(cè)做聯(lián)合篩查,在經(jīng)過臨床試驗(yàn)證實(shí)的基礎(chǔ)上亦可直接采用HPV檢測(cè)作為初篩方法;此類HPV核酸檢測(cè)試劑對(duì)不同年齡段人群的適用情況應(yīng)符合相關(guān)宮頸癌篩查指南的要求。第二,HPV核酸檢測(cè)試劑用于ASC-US人群分流或?qū)m頸癌篩查時(shí),其可覆蓋的HPV基因型別應(yīng)至少包含16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型(共13種),亦可同時(shí)包含26、53、66、73、82型中的一個(gè)或數(shù)個(gè)型別;根據(jù)現(xiàn)有的研究成果,若可檢測(cè)的HPV基因型別不能涵蓋上述13種高危型,則可能造成陰性預(yù)期值無法達(dá)到臨床要求,因此不建議單獨(dú)用于上述預(yù)期用途。對(duì)于基因分型試劑,目前的研究數(shù)據(jù)已證實(shí)16、18型的基因分型檢測(cè)用于輔助(宮頸癌篩查中)HPV核酸檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果的分析,是有臨床意義的,可以進(jìn)行注冊(cè)申請(qǐng),申請(qǐng)人應(yīng)合理陳述預(yù)期用途,其性能評(píng)估和臨床試驗(yàn)中適用于本指導(dǎo)原則的部分應(yīng)參照?qǐng)?zhí)行;但應(yīng)注意:并非所有HPV基因型的分型檢測(cè)均有確定的臨床意義,申請(qǐng)人在研發(fā)HPV基因分型檢測(cè)試劑時(shí)應(yīng)以臨床研究結(jié)果為基礎(chǔ),而不應(yīng)盲目擴(kuò)大分型范圍。第三,低危型HPV一般與尖銳濕疣或低度鱗狀上皮內(nèi)病變相關(guān),但其檢測(cè)的臨床價(jià)值尚不明確,若申請(qǐng)人提出相關(guān)產(chǎn)品注冊(cè),則應(yīng)詳細(xì)解釋其臨床意義和適應(yīng)癥,并提供充分的證據(jù)。第四,鑒于此類試劑的樣本采集方法不利于量值溯源,無法保證定量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,因此建議檢測(cè)試劑定位為定性檢測(cè),本指導(dǎo)原則不適用于進(jìn)行定量或半定量HPV核酸檢測(cè)試劑的注冊(cè);最后,本指導(dǎo)原則只針對(duì)與宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌相關(guān)的高危型HPV檢測(cè),不適用于除宮頸樣本外其他樣本類型的檢測(cè)。

本指導(dǎo)原則適用的檢測(cè)方法主要指基于核酸檢測(cè)的分子生物學(xué)技術(shù)。現(xiàn)有HPV核酸檢測(cè)技術(shù)主要包括雜交捕獲法、酶切信號(hào)放大法、PCR-熒光探針法、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的核酸擴(kuò)增技術(shù)以及PCR-雜交法等。這些方法在性能評(píng)價(jià)上可能會(huì)略有差異,但在技術(shù)指標(biāo)方面均適用于本指導(dǎo)原則,以下有關(guān)注冊(cè)申報(bào)資料的要求主要針對(duì)PCR-熒光探針法提出,其他方法學(xué)試劑應(yīng)針對(duì)產(chǎn)品自身特點(diǎn)進(jìn)行相應(yīng)補(bǔ)充或修正。

由于宮頸癌篩查涉及面廣,故由假陰性和假陽(yáng)性HPV檢測(cè)結(jié)果引起的潛在公共衛(wèi)生損害風(fēng)險(xiǎn)較為顯著。假陰性結(jié)果可能導(dǎo)致宮頸癌診斷和治療不及時(shí),假陽(yáng)性結(jié)果可能導(dǎo)致不必要的頻繁篩查和侵襲性處置。因此,確立良好的性能指標(biāo)并充分理解HPV檢測(cè)的臨床意義,對(duì)于此類產(chǎn)品的安全有效性評(píng)價(jià)至關(guān)重要。產(chǎn)品性能如不符合臨床需求,可能導(dǎo)致對(duì)患者所作的決策錯(cuò)誤??傮w來說,此類試劑分析及臨床性能的評(píng)價(jià)應(yīng)有嚴(yán)格的控制,同時(shí)亦應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注臨床的合理應(yīng)用和檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)解釋。

本指導(dǎo)原則僅包括對(duì)人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測(cè)及基因分型試劑注冊(cè)申報(bào)資料中部分項(xiàng)目的要求,適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜(包括產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料等),應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》(總局令第5號(hào))(以下簡(jiǎn)稱《辦法》)等相關(guān)法規(guī)和文件的要求。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

(一)綜述資料

此類產(chǎn)品的綜述資料中,與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)征背景情況的描述應(yīng)著重于高危型HPV核酸檢測(cè)和宮頸癌之間的相關(guān)性,及HPV檢測(cè)臨床應(yīng)用的限定要求,陳述應(yīng)科學(xué)、客觀且有依據(jù)。與國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品的比較內(nèi)容應(yīng)著重從方法學(xué)及HPV基因型檢出能力等方面進(jìn)行比較。綜述資料的撰寫應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說明》(總局公告2014年第44號(hào))(以下簡(jiǎn)稱44號(hào)公告)的相關(guān)要求。

(二)主要原材料研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分(如有)及企業(yè)參考品、試劑盒對(duì)照品(質(zhì)控品)等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料、對(duì)照品(質(zhì)控品)的定值試驗(yàn)資料等。

1.引物和探針:應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則,提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況。建議設(shè)計(jì)兩套或多套引物、探針以供篩選,針對(duì)所有預(yù)期適用的HPV基因型別進(jìn)行檢出能力和特異性(如交叉反應(yīng))的評(píng)價(jià),選擇最佳組合,并提交篩選的研究數(shù)據(jù)。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括純度檢查、濃度檢查及功能性實(shí)驗(yàn)等。

2.酶:需要的酶主要包括DNA聚合酶,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括DNA聚合酶活性、核酸內(nèi)切酶活性、熱啟動(dòng)能力、熱穩(wěn)定性等;還可能涉及尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG/UNG)和逆轉(zhuǎn)錄酶,亦應(yīng)分別對(duì)其酶活性等進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。

3.dNTP:質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括純度檢查及功能性實(shí)驗(yàn)等。

4.若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn),其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定,并提交生產(chǎn)工藝驗(yàn)證報(bào)告;如主要原材料購(gòu)自其他供應(yīng)商,則需針對(duì)供應(yīng)商的選擇提供評(píng)價(jià)數(shù)據(jù),并提供供應(yīng)商出具的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告,以及申請(qǐng)人對(duì)該原材料進(jìn)行的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。

5.企業(yè)參考品:應(yīng)詳細(xì)說明有關(guān)企業(yè)參考品的原料選擇、制備、定值過程等試驗(yàn)資料。

企業(yè)參考品的核酸性質(zhì)(DNA或RNA)應(yīng)與產(chǎn)品預(yù)期檢測(cè)的靶物質(zhì)一致。鑒于HPV病毒尚不能體外培養(yǎng),企業(yè)參考品可采用感染HPV的細(xì)胞系,也可采用人工克隆或合成的HPV基因組DNA(或轉(zhuǎn)錄RNA)等。具體要求如下:

5.1陽(yáng)性參考品和陰性參考品

無論試劑盒能否進(jìn)行HPV基因分型,陽(yáng)性參考品均應(yīng)針對(duì)所有適用的HPV基因型分別設(shè)置。陰性參考品應(yīng)考慮檢測(cè)特異性的評(píng)價(jià),適當(dāng)納入其他HPV基因型樣品和其他病原體樣品。

5.2 檢測(cè)限參考品

可選擇檢測(cè)限濃度或略高于檢測(cè)限濃度,并針對(duì)不同基因型分別設(shè)置。

5.3 精密度參考品

可不包含所有涉及的HPV基因型,但應(yīng)選擇臨床較常見的或風(fēng)險(xiǎn)程度較高的基因型(至少包含16或18型),并至少設(shè)置一個(gè)弱陽(yáng)性水平。

6.試劑盒對(duì)照品(質(zhì)控品)

試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒對(duì)照品(質(zhì)控品)來實(shí)現(xiàn)。陽(yáng)性對(duì)照品(質(zhì)控品)的核酸性質(zhì)應(yīng)與待測(cè)樣本的靶核酸性質(zhì)一致,如同為DNA或RNA,其中可不包含所有涉及的HPV基因型,但應(yīng)選擇臨床較常見的或風(fēng)險(xiǎn)程度較高的基因型,并至少包含16或18型。陰性對(duì)照品(質(zhì)控品)應(yīng)參與樣本處理和檢測(cè)的全過程,如核酸的平行提取等步驟。企業(yè)應(yīng)對(duì)陽(yáng)性對(duì)照品(質(zhì)控品)的檢測(cè)結(jié)果(如Ct值)做出明確的范圍要求。

內(nèi)對(duì)照(內(nèi)標(biāo))可以對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制,申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)對(duì)照(內(nèi)標(biāo))的引物、探針設(shè)計(jì)和模板濃度做精確驗(yàn)證,既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽(yáng)性曲線又要盡量降低對(duì)靶基因檢測(cè)造成的抑制。對(duì)內(nèi)對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果(如Ct值)亦應(yīng)做出明確的范圍要求。

(三)主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝,可以圖表方式表示,并說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.反應(yīng)原理介紹。

3.詳述樣本收集液、樣本處理方式的選擇和設(shè)置,提供相關(guān)的研究資料。

4.確定最佳反應(yīng)體系的研究資料,包括酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽(yáng)離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。

5.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述,并提交驗(yàn)證資料。

6.如申報(bào)產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑,應(yīng)提交對(duì)核酸分離/純化過程進(jìn)行工藝優(yōu)化的研究資料。

(四)分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)提交生產(chǎn)者在產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能評(píng)價(jià)的研究資料,對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、試驗(yàn)方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn),包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來源等。

針對(duì)不同的樣本采集方式,可能有不同的樣本收集液,申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)不同的樣本收集液情況分別完成性能評(píng)估,包括最低檢測(cè)限和精密度評(píng)價(jià)等,證明不同的樣本采集方式不會(huì)影響試劑的分析性能。

分析性能評(píng)價(jià)的試驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南(CLSI-EP)文件或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。對(duì)于此類產(chǎn)品,性能評(píng)估中所用樣品(除非特別說明)可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。各項(xiàng)性能評(píng)價(jià)應(yīng)符合以下要求。

1.核酸分離/純化性能(如適用)

在進(jìn)行靶核酸檢測(cè)前,應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂岱蛛x/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的核酸外,還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用,盡可能去除PCR抑制物。無論檢測(cè)試劑是否含有核酸分離/純化的組分,企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測(cè)試劑的特性,對(duì)配合使用的核酸分離/純化試劑的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗(yàn)證,提供詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

2.陽(yáng)性/陰性參考品符合率

陽(yáng)性參考品的檢測(cè)旨在驗(yàn)證各種HPV基因型均可以在適當(dāng)?shù)臐舛缺粰z測(cè)到。陰性參考品則應(yīng)檢測(cè)為陰性。

3.最低檢測(cè)限

針對(duì)每種不同的HPV基因型分別配制系列稀釋的樣品進(jìn)行最低檢測(cè)限的評(píng)價(jià),系列稀釋度應(yīng)能夠覆蓋大部分檢出概率區(qū)間(0~100%),可通過概率計(jì)算或其他適當(dāng)方法進(jìn)行測(cè)算選取適當(dāng)檢出率水平的濃度作為最低檢測(cè)限確定的標(biāo)準(zhǔn),如95%(n≥20)或100%的陽(yáng)性檢出率水平。

4.分析特異性

4.1交叉反應(yīng)

申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)可在人類泌尿、生殖道寄生微生物或經(jīng)性傳播的病原體等進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證,用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣品,除HPV外,其他病原體應(yīng)盡量采用滅活病原體培養(yǎng)物或臨床樣本。建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證,通常,細(xì)菌感染的水平為106 CFU/mL或更高,病毒為105 PFU/mL或更高。申請(qǐng)人應(yīng)詳細(xì)說明交叉反應(yīng)樣本來源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果。病原體種類主要考慮以下幾方面:預(yù)期用途不包含的其他基因型HPV、人類泌尿、生殖道寄生微生物或可經(jīng)性傳播的其他病原體、其他常見病原體。(詳見表1)

此外,申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)被檢測(cè)靶序列與人基因組及可能存在于人類泌尿、生殖道的微生物基因組進(jìn)行基因序列比對(duì),并提交比對(duì)結(jié)果,如有同源性序列則應(yīng)進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

表1 用于交叉反應(yīng)研究的病原體

(其中標(biāo)記*的項(xiàng)目為必做項(xiàng)目)

* HPV 6、11、16、18、26、31、33、35、39、40、42、43、44、45、51、52、53、54、56、58、59、61、66、67、68、69、70、71、72、73、81、82、83等基因型中產(chǎn)品預(yù)期用途不包含的HPV基因型
*單純皰疹病毒Ⅱ型
*梅毒螺旋體
*解脲支原體、人型支原體、生殖支原體中至少兩種
*淋病奈瑟菌(淋球菌)
*白色念珠菌
*陰道毛滴蟲
*沙眼衣原體
陰道棒狀桿菌
短小棒狀桿菌
鮑曼不動(dòng)桿菌
恥垢分枝桿菌
脆弱類桿菌
陰溝腸桿菌
糞腸球菌
大腸桿菌
金黃色葡萄球菌
表皮葡萄球菌
甲型鏈球菌
乙型肝炎病毒
丙型肝炎病毒
HIV病毒
EB病毒
巨細(xì)胞病毒
單純皰疹病毒Ⅰ型

4.2干擾試驗(yàn)

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型,針對(duì)可能存在的干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(“最差條件”)條件下進(jìn)行評(píng)價(jià),并針對(duì)有代表性的HPV基因型(如16、18型),至少在HPV臨界陽(yáng)性水平進(jìn)行干擾試驗(yàn)驗(yàn)證。干擾物質(zhì)的選取應(yīng)至少包括:血紅蛋白、白細(xì)胞、宮頸粘液、陰道避孕藥物、女性衛(wèi)生用品、陰道用抗真菌藥物、陰道潤(rùn)滑劑等。

5.精密度

企業(yè)應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo),如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。鑒于HPV病毒尚不能體外培養(yǎng),因此可以采用感染HPV的細(xì)胞系,也可采用人工克隆或合成的HPV基因組DNA(或轉(zhuǎn)錄RNA)等代替;但模擬樣本并不能體現(xiàn)臨床樣本可能帶來的所有變異因素,因此精密度評(píng)價(jià)中應(yīng)同時(shí)包含若干臨床樣本,且精密度評(píng)價(jià)試驗(yàn)應(yīng)包含核酸分離/純化步驟。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求。

(1)對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證,除檢測(cè)試劑(包括核酸分離/純化組分)本身的影響外,還應(yīng)對(duì)分析儀、操作者、地點(diǎn)、檢測(cè)輪次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

(2)設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期,例如:為期至少20天的檢測(cè),每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè),從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

(3)用于精密度評(píng)價(jià)的人工模擬樣品和臨床樣本均應(yīng)至少包含3個(gè)水平:陰性樣品、臨界陽(yáng)性樣品、(中或強(qiáng))陽(yáng)性樣品,并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫螅渲?,人工模擬樣品應(yīng)針對(duì)所有適用的HPV基因型別分別設(shè)置,臨床樣本精密度評(píng)價(jià)中的每一次檢測(cè)均應(yīng)從核酸提取開始。

(五)陽(yáng)性判斷值確定資料

對(duì)于此類試劑,陽(yáng)性判斷值即為能夠獲得理想的臨床靈敏度和臨床特異性的臨界值(Cutoff),對(duì)于熒光探針PCR方法即為Ct值的確定資料,對(duì)于PCR-點(diǎn)雜交法即為最低檢測(cè)限(LoD)。建議采用受試者工作特征(ROC)曲線的方式進(jìn)行相關(guān)研究。申請(qǐng)人可選取適當(dāng)?shù)呐R床樣本進(jìn)行初步試驗(yàn)以確定陽(yáng)性判斷值,并在后續(xù)臨床試驗(yàn)中確認(rèn)其適用性,亦可將此研究納入下文所述的有關(guān)ASC-US人群分流的臨床試驗(yàn)中;無論采用何種方式均應(yīng)明確樣本入組標(biāo)準(zhǔn),并說明試驗(yàn)方案及其合理性。

(六)穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容,申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究,以及試劑開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究。后者則是指適用樣本的保存條件、保存時(shí)間等方面的研究,如樣本采集方法不同,則需分別完成穩(wěn)定性研究。對(duì)于此類試劑,如核酸提取液不一定立即進(jìn)行檢測(cè),則還需對(duì)核酸提取液的保存條件和穩(wěn)定性進(jìn)行研究。

在穩(wěn)定性研究中,應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)臏囟确秶诙鄠€(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行評(píng)價(jià),申請(qǐng)人應(yīng)提交有關(guān)穩(wěn)定性研究方案的確定依據(jù)、具體的試驗(yàn)方法及詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)、結(jié)論。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

(七)臨床試驗(yàn)

臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào))的要求。

1.試驗(yàn)方法

此類產(chǎn)品的臨床試驗(yàn)應(yīng)包括兩部分內(nèi)容,第一部分為HPV核酸檢測(cè)準(zhǔn)確性驗(yàn)證;第二部分則為試劑盒針對(duì)具體預(yù)期用途的臨床有效性驗(yàn)證。兩部分臨床試驗(yàn)的具體方法應(yīng)滿足如下要求:

1.1 HPV核酸檢測(cè)準(zhǔn)確性驗(yàn)證

申請(qǐng)人應(yīng)選擇已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品和/或核酸序列測(cè)定方法作為對(duì)比方法,采用擬申報(bào)產(chǎn)品與之進(jìn)行比較研究試驗(yàn),以評(píng)價(jià)擬申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)目標(biāo)HPV基因型的能力。需要注意的是,當(dāng)擬申報(bào)產(chǎn)品的陽(yáng)性判斷值高于最低檢測(cè)限水平時(shí),檢測(cè)結(jié)果判定為“陰性”的情況包括兩種,其一為待測(cè)樣本中存在高于最低檢測(cè)限水平的HPV靶核酸,但靶核酸水平低于陽(yáng)性判斷值;其二為待測(cè)樣本中無HPV靶核酸,或靶核酸水平低于最低檢測(cè)限水平。在檢測(cè)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析中應(yīng)分別列明各種情況,可參考表2。

表2 HPV核酸檢測(cè)結(jié)果

擬申報(bào)產(chǎn)品對(duì)比方法/測(cè)序總計(jì)
陽(yáng)性陰性
陽(yáng)性


陰性可檢測(cè)到
               不可檢測(cè)到
總計(jì)


病例選擇及樣本類型:受試者應(yīng)包含各種臨床表現(xiàn)的人群,如:宮頸細(xì)胞學(xué)檢查正常者、宮頸上皮細(xì)胞異常者以及診斷為宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)和宮頸浸潤(rùn)癌等的患者,受試者年齡應(yīng)在<30、30~39、40歲以上年齡段均有分布。樣本類型為人宮頸樣本,總例數(shù)不少于500例。對(duì)于基因分型試劑的臨床試驗(yàn),每種HPV基因型均應(yīng)具有一定的陽(yáng)性例數(shù)。

鑒于此類產(chǎn)品的樣本采集方法不易標(biāo)準(zhǔn)化,而樣本采集過程對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要,因此,如產(chǎn)品可采用不止一種樣本采集方法(包括使用的采集設(shè)備和樣本收集液),則應(yīng)針對(duì)不同的采集方式進(jìn)行同源樣本的比較研究試驗(yàn),證明不同的樣本采集方式不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。相關(guān)比較研究試驗(yàn)應(yīng)于2家以上(含兩家)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行,樣本例數(shù)不少于100例。

對(duì)比試劑:應(yīng)選取已上市同類產(chǎn)品和/或核酸序列測(cè)定方法。鑒于不同的產(chǎn)品其預(yù)期用途涵蓋的基因型別不盡相同,因此應(yīng)充分考慮對(duì)比方法的適用范圍和檢測(cè)性能等,確保其與擬申報(bào)產(chǎn)品具有可比性。必要時(shí),可同時(shí)選取超過一種對(duì)比方法,但應(yīng)以一種方法為主。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)比較研究試驗(yàn)的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行合理分析。對(duì)于此類試劑的比較研究試驗(yàn),常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種方法定性檢測(cè)結(jié)果,計(jì)算陽(yáng)性符合率、陰性符合率和總符合率,并計(jì)算95%置信區(qū)間,對(duì)定性檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行配對(duì)四格表χ2檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn),以考察兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性。

對(duì)于基因分型試劑,臨床試驗(yàn)中應(yīng)分別驗(yàn)證該產(chǎn)品對(duì)可鑒別HPV基因型的臨床檢測(cè)準(zhǔn)確性,針對(duì)不同基因型HPV分別完成如上所述的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

結(jié)果差異樣本的分析和驗(yàn)證:對(duì)于兩種方法的檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本,申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)具體情況進(jìn)行合理分析,必要時(shí)選擇其他合理的方法進(jìn)行驗(yàn)證,亦可結(jié)合患者的臨床病情進(jìn)行分析。

有關(guān)核酸序列測(cè)定方法的資料要求:臨床試驗(yàn)中如涉及核酸序列測(cè)定方法,則建議對(duì)擴(kuò)增子進(jìn)行雙向測(cè)序。應(yīng)在臨床研究報(bào)告中對(duì)選用的測(cè)序方法做詳細(xì)介紹,并提供以下關(guān)于測(cè)序試驗(yàn)的詳細(xì)信息及資料。

1)測(cè)序方法原理、測(cè)序儀型號(hào)、測(cè)序試劑及消耗品的相關(guān)信息。

2)測(cè)序方法所用引物相關(guān)信息,如基因區(qū)段選擇,分子量、純度、功能性試驗(yàn)等資料。

3)對(duì)所選測(cè)序方法的分析性能進(jìn)行合理驗(yàn)證,尤其是最低檢測(cè)限的確認(rèn),建議將所選測(cè)序方法與擬申報(bào)產(chǎn)品的相關(guān)性能進(jìn)行適當(dāng)比對(duì)分析。

4)測(cè)序方法應(yīng)建立合理的陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品對(duì)臨床樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

5)提交有代表性的樣本測(cè)序圖譜及結(jié)果分析資料。

1.2針對(duì)預(yù)期用途的臨床有效性驗(yàn)證

1.2.1針對(duì)ASC-US人群分流用途,申請(qǐng)人應(yīng)在適合進(jìn)行宮頸細(xì)胞學(xué)檢查的女性中,入組宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為ASC-US的受試者,應(yīng)避免選取已確定需進(jìn)行陰道鏡檢查的人群,以免造成入組人群的傾向性。入組人群應(yīng)盡量在不同的年齡范圍均有分布(<30、30~39和40以上),各年齡組受試者例數(shù)至少應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針對(duì)入組的ASC-US人群首先采用擬申報(bào)產(chǎn)品進(jìn)行HPV核酸檢測(cè),然后,無論HPV檢測(cè)結(jié)果如何,均應(yīng)進(jìn)行陰道鏡檢查,根據(jù)陰道鏡檢查結(jié)果,必要時(shí)取樣進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。建議采用同一份宮頸上皮細(xì)胞樣本進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查和HPV檢測(cè),以避免樣本取材不同帶來的偏差;而宮頸細(xì)胞樣本采集與陰道鏡檢查之間的時(shí)間間隔不應(yīng)過長(zhǎng),建議不超過12周。以陰道鏡檢查和組織病理學(xué)檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),評(píng)價(jià)擬申報(bào)產(chǎn)品的臨床靈敏度、臨床特異性、陽(yáng)性預(yù)期值、陰性預(yù)期值、陽(yáng)性似然比、陰性似然比,并采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄓ?jì)算95%置信區(qū)間;對(duì)于基因分型試劑,還需針對(duì)可鑒別的基因型單獨(dú)完成上述數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,應(yīng)能夠支持基因分型的臨床意義;數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析方法參見表3和表4。

臨床試驗(yàn)結(jié)果:應(yīng)通過分析陽(yáng)性似然比和陰性似然比的結(jié)果判斷擬申報(bào)產(chǎn)品用于ASC-US人群分流的臨床性能是否能夠滿足臨床要求。

樣本例數(shù):應(yīng)根據(jù)檢測(cè)試劑靈敏度要求、疾病發(fā)病率等對(duì)入組樣本例數(shù)進(jìn)行科學(xué)的分析和計(jì)算,臨床試驗(yàn)終點(diǎn)病理學(xué)檢查結(jié)果≥CIN2的例數(shù)應(yīng)不少于60例。

表3 在ASC-US人群中HPV核酸檢測(cè)結(jié)果與疾病狀態(tài)相關(guān)性

HPV檢測(cè)
結(jié)果
陰道鏡陰性(無病理檢查)組織病理學(xué)結(jié)果合計(jì)
正常CIN1CIN2≥CIN3
HPV陽(yáng)性A1A2A3A4A5A1+A2+A3+A4+A5
HPV陰性B1B2B3B4B5B1+B2+B3+B4+B5
合計(jì)A1+B1A2+B2A3+B3A4+B4A5+B5N

針對(duì)≥CIN2水平的臨床性能評(píng)價(jià):

臨床靈敏度= (A4+A5)/(A4+B4+A5+B5)

臨床特異性= (B1+B2+B3)/(A1+B1+A2+B2+A3+B3)

陽(yáng)性預(yù)期值(PPV)=(A4+A5)/(A1+A2+A3+A4+A5)

陰性預(yù)期值(NPV)=(B1+B2+B3)/(B1+B2+B3+B4+B5)

陽(yáng)性似然比=臨床靈敏度/(1-臨床特異性)

陰性似然比=(1-臨床靈敏度)/臨床特異性

針對(duì)≥CIN3水平的臨床性能評(píng)價(jià):

臨床靈敏度= A5/(A5+B5);

臨床特異性= (B1+B2+B3+B4)/(A1+B1+A2+B2+A3+B3+A4+B4)

陽(yáng)性預(yù)期值(PPV)=A5/(A1+A2+A3+A4+A5)

陰性預(yù)期值(NPV)=(B1+B2+B3+B4)/(B1+B2+B3+B4+B5)

陽(yáng)性似然比=臨床靈敏度/(1-臨床特異性)

陰性似然比=(1-臨床靈敏度)/臨床特異性

表4在ASC-US人群中HPV基因分型檢測(cè)結(jié)果

與疾病狀態(tài)相關(guān)性

HPV檢測(cè)
結(jié)果
陰道鏡陰性(無病理檢查)組織病理學(xué)結(jié)果合計(jì)
正常CIN1CIN2≥CIN3
HPV16陽(yáng)性A1A2A3A4A5A1+A2+A3+A4+A5
HPV18陽(yáng)性B1B2B3B4B5B1+B2+B3+B4+B5
HPV16/18陽(yáng)性C1C2C3C4C5C1+C2+C3+C4+C5
其他HPV
陽(yáng)性
D1D2D3D4D5D1+D2+D3+D4+D5
HPV陰性E1E2E3E4E5E1+E2+E3+E4+E5
合計(jì)N

1.2.2針對(duì)宮頸癌聯(lián)合篩查用途,入組的受試人群應(yīng)為無宮頸上皮內(nèi)病變(NILM)的30歲以上女性。

基礎(chǔ)檢測(cè):入組人群應(yīng)分別接受擬申報(bào)產(chǎn)品的HPV檢測(cè),記為基礎(chǔ)檢測(cè)數(shù)據(jù),其中,若擬申報(bào)產(chǎn)品可進(jìn)行16、18型HPV分型檢測(cè),則16、18型陽(yáng)性的受試者應(yīng)立即進(jìn)行陰道鏡檢查,必要時(shí)結(jié)合組織病理學(xué)檢查,結(jié)果為≥CIN2的受試者判為“陽(yáng)性”,不再進(jìn)行下述隨訪,其他受試者進(jìn)入隨訪程序。

受試者隨訪:隨訪時(shí)間建議至少持續(xù)三年?;A(chǔ)檢測(cè)結(jié)果HPV陽(yáng)性的受試者每年接受隨訪,HPV陰性的受試者每三年接受一次隨訪,以及在隨訪終點(diǎn)接受隨訪。隨訪中應(yīng)對(duì)受試者進(jìn)行宮頸細(xì)胞學(xué)檢查,其中檢查結(jié)果為正常者繼續(xù)隨訪,結(jié)果為≥ASC-US的受試者則應(yīng)進(jìn)行陰道鏡檢查,必要時(shí)結(jié)合組織病理學(xué)檢查,結(jié)果為≥CIN2的受試者判為“陽(yáng)性”,并終止隨訪,其他均應(yīng)持續(xù)至隨訪終點(diǎn),最終未發(fā)展為≥CIN2的受試者判為“陰性”。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:針對(duì)HPV基礎(chǔ)檢測(cè)結(jié)果為陰性和陽(yáng)性的受試者分別評(píng)價(jià)其發(fā)展為≥CIN2的絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值和發(fā)展為≥CIN3的絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值,計(jì)算HPV陽(yáng)性組相對(duì)于陰性組發(fā)展為≥CIN2和≥CIN3的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值及95%置信區(qū)間,應(yīng)與“1”具有顯著性差異。對(duì)于HPV基因分型檢測(cè)試劑,還應(yīng)分別評(píng)估可鑒別基因型陽(yáng)性結(jié)果如HPV16+、HPV18+、HPV16和/或18+等相對(duì)于HPV陰性和相對(duì)于其他HPV基因型別陽(yáng)性的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn),以及其他HPV基因型別陽(yáng)性及HPV陽(yáng)性相對(duì)于HPV陰性的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)。計(jì)算相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值的95%置信區(qū)間,應(yīng)與“1”具有顯著性差異。此外,HPV陰性人群的絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值應(yīng)足夠低,以證明該方法對(duì)陰性人群的保護(hù)作用。最后,應(yīng)給出受試人群總體的≥CIN2絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值和≥CIN3絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值。風(fēng)險(xiǎn)值的計(jì)算可參考如下方法(表5和表6):

表5 HPV檢測(cè)結(jié)果和疾病(≥CIN2)狀態(tài)相關(guān)性

HPV檢測(cè)結(jié)果≥CIN2人數(shù)<CIN2人數(shù)合計(jì)
HPV16陽(yáng)性A1A2A1+A2
HPV18陽(yáng)性B1B2B1+B2
HPV16和/或18陽(yáng)性C1C2C1+C2
HPV其他型陽(yáng)性D1D2D1+D2
HPV陽(yáng)性E1E2E1+E2
HPV陰性F1F2F1+F2
合計(jì)A1+B1+C1+D1
               +E1+F1
A2+B2+C2+D2
               +E2+F2
N

表6 ≥CIN2的風(fēng)險(xiǎn)值計(jì)算

HPV檢測(cè)結(jié)果絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值95%置信區(qū)間
相對(duì)HPV陰性相對(duì)其他HPV陽(yáng)性
HPV16陽(yáng)性X1=A1/(A1+A2)X1/X0X1/X4(2.5%,97.5%)
HPV18陽(yáng)性X2=B1/(B1+B2)X2/X0X2/X4(2.5%,97.5%)
HPV16和/或18陽(yáng)性X3=C1/(C1+C2)X3/X0X3/X4(2.5%,97.5%)
HPV其他型
陽(yáng)性
X4=D1/(D1+D2)X4/X0-(2.5%,97.5%)
HPV陽(yáng)性X5=E1/(E1+E2)X5/X0-(2.5%,97.5%)
HPV陰性X0=F1/(F1+F2)---

95%置信區(qū)間的計(jì)算方法推薦:Altman等人提出的Score Method或Clopper等人提出的Clopper-Pearson Method。

樣本要求:此項(xiàng)臨床試驗(yàn)的入組人群應(yīng)盡量在不同的年齡范圍均有分布(30~39和40以上)。應(yīng)根據(jù)檢測(cè)試劑靈敏度要求、疾病發(fā)病率等對(duì)入組樣本例數(shù)進(jìn)行科學(xué)的分析和計(jì)算,并根據(jù)臨床實(shí)際情況對(duì)病例脫落比例設(shè)定合理要求,隨訪終點(diǎn)病理學(xué)檢查結(jié)果≥CIN2的例數(shù)應(yīng)不少于60例。

1.2.3針對(duì)宮頸癌初篩用途,申請(qǐng)人應(yīng)按照此項(xiàng)預(yù)期用途所述,隨機(jī)選取需接受常規(guī)宮頸癌篩查且宮頸細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果未知的女性作為受試者。

基礎(chǔ)檢查:所有受試者分別進(jìn)行HPV檢測(cè)和細(xì)胞學(xué)檢查,作為基礎(chǔ)檢查數(shù)據(jù);其中,(HPV基因分型試劑)檢測(cè)結(jié)果為16/18型(或其他可鑒別基因型)陽(yáng)性的受試者、HPV陽(yáng)性同時(shí)細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果≥ASC-US的受試者應(yīng)立即進(jìn)行陰道鏡檢查,必要時(shí)結(jié)合組織病理學(xué)檢查,結(jié)果為≥CIN2的受試者判為“陽(yáng)性”,不再進(jìn)行下述隨訪,其他受試者進(jìn)入隨訪程序。

受試者隨訪:隨訪時(shí)間至少持續(xù)三年?;A(chǔ)檢查結(jié)果HPV陽(yáng)性或細(xì)胞學(xué)檢查≥ASC-US的受試者每年接受隨訪,HPV陰性且細(xì)胞學(xué)檢查為正常的受試者每三年接受一次隨訪,以及在隨訪終點(diǎn)接受隨訪。隨訪方法與上述第1.2.2條所述一致,至至少三年或組織病理學(xué)檢查結(jié)果為≥CIN2。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:可參照上述第1.2.2條所述方法,HPV+組相對(duì)于HPV-組應(yīng)呈現(xiàn)具有顯著性差異的高風(fēng)險(xiǎn)值,NILM組相對(duì)于HPV-組應(yīng)呈現(xiàn)具有顯著差性異的高風(fēng)險(xiǎn)值。對(duì)于HPV基因分型檢測(cè)試劑,還應(yīng)分別評(píng)估可鑒別基因型陽(yáng)性結(jié)果如HPV16+、HPV18+、HPV16和/或18+等相對(duì)于HPV陰性和相對(duì)于其他HPV基因型別陽(yáng)性的風(fēng)險(xiǎn),以及其他HPV基因型別陽(yáng)性及HPV陽(yáng)性相對(duì)于HPV陰性的風(fēng)險(xiǎn)。此外,HPV陰性人群的絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值應(yīng)足夠低;同時(shí)計(jì)算受試人群總體的≥CIN2絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值和≥CIN3絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)值。

此項(xiàng)臨床試驗(yàn)的入組人群同樣應(yīng)在適用的年齡范圍內(nèi)的不同年齡段均有分布(<30、30~39和40以上),且各年齡段人群均具有一定數(shù)量,特別是當(dāng)該預(yù)期用途適用于30歲以下人群時(shí),該年齡段應(yīng)有一定的陽(yáng)性樣本量,并針對(duì)該年齡段單獨(dú)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,以驗(yàn)證該試劑的初篩性能。樣本例數(shù)、脫落比例的要求可參考上述第1.2.2條。

綜上,申請(qǐng)人應(yīng)分別從HPV核酸檢測(cè)準(zhǔn)確性和臨床意義兩方面評(píng)價(jià)產(chǎn)品的臨床性能。若臨床試驗(yàn)未得到有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)果,申請(qǐng)人應(yīng)考慮陽(yáng)性判斷值設(shè)置是否科學(xué),受試者入組標(biāo)準(zhǔn)是否存在偏差,受試者例數(shù)是否足夠,病例脫落比例是否可以接受,或者隨訪年限是否需要延長(zhǎng)等因素。同時(shí),值得注意的是,臨床試驗(yàn)的結(jié)果需綜合評(píng)價(jià),除了有關(guān)靈敏度、特異性、預(yù)期值、似然比、風(fēng)險(xiǎn)值的評(píng)價(jià)以外,HPV陽(yáng)性率及CIN發(fā)病率等的統(tǒng)計(jì)同樣重要,應(yīng)符合客觀規(guī)律。

2.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇

應(yīng)選擇不少于3家(含3家)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu),按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可,其選擇應(yīng)盡量考慮擬申報(bào)產(chǎn)品的特點(diǎn)和預(yù)期用途,綜合流行病學(xué)背景,使臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和受試者的選擇具有一定的地域代表性。且臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì),實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié),熟悉評(píng)價(jià)方案。

3.倫理學(xué)要求

臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則,必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)的同意。研究者應(yīng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)性,應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見及受試者的知情同意書。

4.臨床試驗(yàn)方案

開展臨床試驗(yàn)前,申請(qǐng)人應(yīng)與各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)協(xié)商制定統(tǒng)一的、科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案,并按照臨床試驗(yàn)方案組織制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,并進(jìn)行驗(yàn)證,以確保臨床試驗(yàn)操作在各個(gè)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)之間的一致性。在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中均應(yīng)遵循預(yù)定的方案,不可隨意改動(dòng)。臨床試驗(yàn)應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行,并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作,申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外,不得隨意干涉試驗(yàn)進(jìn)程,尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn),任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性,并在臨床試驗(yàn)方案中詳細(xì)說明樣本編盲和揭盲的操作流程。

關(guān)于比較研究試驗(yàn),各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比方法和結(jié)果不符樣本的確認(rèn)方法應(yīng)一致,以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;臨床試驗(yàn)中涉及宮頸細(xì)胞學(xué)檢查、陰道鏡檢查及組織病理學(xué)檢查,應(yīng)采用統(tǒng)一判讀標(biāo)準(zhǔn)等手段,保持各臨床研究機(jī)構(gòu)間判讀的一致性;受試者隨訪中樣本脫落的判定標(biāo)準(zhǔn)以及試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計(jì)方法等亦應(yīng)在各臨床研究機(jī)構(gòu)間保持一致。以上內(nèi)容均應(yīng)在臨床試驗(yàn)方案中有明確、清晰的表述。

5.質(zhì)量控制

臨床試驗(yàn)開始前,應(yīng)進(jìn)行臨床試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn),以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等,最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下,最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

6.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求,臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述,應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述,并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

6.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

6.1.1 臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹。

6.1.2 病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)、樣本編盲和揭盲的操作流程等。

6.1.3 樣本類型,樣本的收集、處理及保存等。

6.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

6.2 具體的臨床試驗(yàn)情況

6.2.1 臨床試驗(yàn)所用體外診斷試劑及儀器的名稱、批號(hào)、機(jī)型等信息。

6.2.2 對(duì)各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況、不同基因型分布情況進(jìn)行綜合,建議以列表或圖示方式列出各年齡組和各種基因型別的樣本例數(shù)。

6.2.3 質(zhì)量控制,試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況。

6.2.4 具體試驗(yàn)過程,樣本檢測(cè)、樣本長(zhǎng)期保存、受試者宮頸細(xì)胞學(xué)檢查、陰道鏡檢查和組織病理學(xué)檢查、數(shù)據(jù)收集、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等;受試者隨訪的操作方法及病例脫落情況,及是否符合臨床試驗(yàn)方案。

6.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或其他合理方法驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、隨訪中病例脫落比例、研究過程中是否涉及對(duì)方案的修改。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

6.4 討論和結(jié)論

對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果,對(duì)本次臨床研究有無特別說明,最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

(八)產(chǎn)品技術(shù)要求

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下,根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、前期臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果,依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn),按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào))的有關(guān)要求,編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。

HPV核酸檢測(cè)及基因分型試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括:物理性狀、試劑盒內(nèi)陰/陽(yáng)性對(duì)照品(質(zhì)控品)的符合性、陰/陽(yáng)性參考品符合率、精密度、最低檢測(cè)限等。陽(yáng)性參考品主要考察對(duì)試劑盒適用范圍內(nèi)不同基因型HPV的檢測(cè)能力,陰性參考品則重點(diǎn)對(duì)申報(bào)試劑的分析特異性進(jìn)行驗(yàn)證。

如果申報(bào)試劑已有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布,則申請(qǐng)人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測(cè)要求。

按照《辦法》的規(guī)定,此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑,申請(qǐng)人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求,以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求,附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。

(九)注冊(cè)檢驗(yàn)

根據(jù)《辦法》的要求,首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢驗(yàn)。對(duì)于已經(jīng)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品的檢測(cè)項(xiàng)目,在注冊(cè)檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)采用相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn),對(duì)于目前尚無國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的、參考品的項(xiàng)目,生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的參考品體系并提供相應(yīng)的企業(yè)參考品。

(十)產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息,是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù),因此,產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào))的要求,進(jìn)口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外,其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性,翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致,如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn),則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注,并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求,下面對(duì)HPV核酸檢測(cè)及基因分型試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明,以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說明書編制。

1.【預(yù)期用途】

HPV核酸檢測(cè)及基因分型試劑的臨床意義主要在于對(duì)婦女罹患宮頸疾病的風(fēng)險(xiǎn)程度提供信息,以便于臨床醫(yī)生結(jié)合病人的其他檢查結(jié)果進(jìn)行更加準(zhǔn)確的疾病判斷和科學(xué)的患者管理。

申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)相關(guān)臨床研究結(jié)果確定產(chǎn)品的預(yù)期用途。一般的,此類產(chǎn)品預(yù)期用途描述包含以下幾方面:

(1)該產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)女性宮頸樣本(如宮頸脫落上皮細(xì)胞或分泌物等)中高危型人乳頭瘤病毒(HPV)(列出具體能夠檢測(cè)的基因型)核酸(明確檢測(cè)靶物質(zhì),如DNA、RNA)。明確該產(chǎn)品是否能夠鑒別HPV基因型。

(2)該類產(chǎn)品主要用于:

①篩查宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為ASC-US(意義未確定的非典型鱗狀上皮細(xì)胞)結(jié)果的患者,以確定是否需要進(jìn)行陰道鏡檢查(以下簡(jiǎn)稱ASC-US人群分流用途);

②對(duì)于30歲及以上的女性,通過檢測(cè)是否有高危型HPV感染,與宮頸細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合進(jìn)行宮頸癌篩查,此檢測(cè)結(jié)合細(xì)胞學(xué)病史和其他風(fēng)險(xiǎn)因素的評(píng)估、以及臨床診療和篩查指南的要求,用于指導(dǎo)患者的管理;

③對(duì)于某年齡段(根據(jù)臨床試驗(yàn)結(jié)果而定)女性,通過檢測(cè)是否有高危型HPV感染,進(jìn)行宮頸癌篩查,此檢測(cè)結(jié)合細(xì)胞學(xué)病史和其他風(fēng)險(xiǎn)因素的評(píng)估、以及臨床診療和篩查指南的要求,用于指導(dǎo)患者的管理。

未做相關(guān)臨床試驗(yàn)的產(chǎn)品應(yīng)在此項(xiàng)下聲明:由于未做相關(guān)驗(yàn)證,本產(chǎn)品不能用于相關(guān)臨床預(yù)期用途(按照如上項(xiàng)目描述)。

(3)申請(qǐng)人應(yīng)在此項(xiàng)下強(qiáng)調(diào):

①如申報(bào)產(chǎn)品不包含上述第(2)③條所述的預(yù)期用途,則申請(qǐng)人應(yīng)聲明:此檢測(cè)不能獨(dú)立或優(yōu)先于宮頸細(xì)胞學(xué)檢查應(yīng)用,不推薦在任何年齡段的人群中單獨(dú)使用本檢測(cè)進(jìn)行宮頸癌篩查;此方法不能代替宮頸細(xì)胞學(xué)檢查。

②年齡<30歲的女性中,HPV感染率很高,同時(shí)自主清除率也很高,因此對(duì)這部分人群,如宮頸細(xì)胞學(xué)檢查正常則不應(yīng)再采用HPV檢測(cè)進(jìn)行聯(lián)合篩查,建議僅采用宮頸細(xì)胞學(xué)方法進(jìn)行篩查,或參照上述第(2)③條所述進(jìn)行篩查。

③本試劑檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合宮頸細(xì)胞學(xué)檢查及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析,不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。

④HPV核酸檢測(cè)試劑的應(yīng)用應(yīng)符合相關(guān)臨床診療和篩查指南的要求。

(4)此外申請(qǐng)人還應(yīng)就以下內(nèi)容進(jìn)行簡(jiǎn)要介紹:

①臨床背景的介紹,包括病原體生物學(xué)特征,基因型劃分,感染后的臨床癥狀及該檢測(cè)的臨床意義等。著重說明HPV高危型感染與宮頸癌的相關(guān)性,描述應(yīng)客觀、科學(xué)、全面。

②說明申報(bào)產(chǎn)品選擇HPV基因型的依據(jù)和考慮。原則上建議選擇至少包含16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68基因型在內(nèi)的多基因型聯(lián)合檢測(cè)的設(shè)計(jì)方式,以保證該產(chǎn)品用于宮頸癌篩查及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的能力,亦可同時(shí)包含26、53、66、73、82型中的一個(gè)或數(shù)個(gè)型別。不建議包含其他低危型HPV。

2.【檢驗(yàn)原理】

詳細(xì)說明試劑盒技術(shù)原理,及核酸分離/純化方法、原理。說明檢測(cè)的靶基因座位、序列長(zhǎng)度等;介紹引物及探針設(shè)計(jì)、不同樣品反應(yīng)體系(管)組合、對(duì)照品(質(zhì)控品)設(shè)置及熒光信號(hào)標(biāo)記等。如添加了相關(guān)的防污染組分(如尿嘧啶DNA糖基化酶,即UDG/UNG等),也應(yīng)對(duì)其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。

3.【主要組成成份】

詳細(xì)說明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、成分、濃度等信息,如含有生物源性物質(zhì),應(yīng)說明其生物學(xué)來源、活性及其他特性;說明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分,應(yīng)列出相關(guān)試劑的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、貨號(hào)以及醫(yī)療器械注冊(cè)證號(hào)(如有)等詳細(xì)信息。當(dāng)試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分時(shí),應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的如上信息。

4.【儲(chǔ)存條件及有效期】

試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等。應(yīng)與相應(yīng)的穩(wěn)定性研究結(jié)論一致。

5.【適用儀器】

所有適用的儀器型號(hào),提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

6.【樣本要求】

明確適用的樣本類型。并詳細(xì)描述樣本采集及預(yù)處理要求、運(yùn)輸要求、保存條件及期限等。特別是樣本采集所需設(shè)備及保存液,需特別明確供應(yīng)商、貨號(hào)及注冊(cè)證號(hào)(如有)。有關(guān)描述均應(yīng)建立在相關(guān)性能評(píng)價(jià)及穩(wěn)定性研究的基礎(chǔ)上。

樣本的取材及處理方式等若有通用的技術(shù)規(guī)范或指南,則應(yīng)遵循,并在此處引用。

7.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟,包括:

7.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

7.2核酸分離/純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)。對(duì)照品(質(zhì)控品)參與樣本核酸的平行提取的要求等。

7.3擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備:各組分加樣體積、順序、相關(guān)注意事項(xiàng)等。

7.4逆轉(zhuǎn)錄過程(如涉及)的溫度和時(shí)間設(shè)置、PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。

7.5儀器設(shè)置:特殊參數(shù),待測(cè)基因、內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇等。

7.6質(zhì)量控制:說明對(duì)照品(質(zhì)控品)的檢測(cè)要求。

8.【陽(yáng)性判斷值】

簡(jiǎn)要總結(jié)陽(yáng)性判斷值研究方法及結(jié)論。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合對(duì)照品(質(zhì)控品)以及樣本管中靶基因和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果,對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)以臨床試驗(yàn)結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療或篩查指南,則應(yīng)在此項(xiàng)下引用,相應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。

10.【檢驗(yàn)方法的局限性】

應(yīng)至少包括如下描述:

(1)本試劑檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合宮頸細(xì)胞學(xué)檢查及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析,不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。

(2)不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理、以及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo):

(1)對(duì)相應(yīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品(如有)檢測(cè)的符合情況。

(2)最低檢測(cè)限:說明針對(duì)各種HPV基因型的最低檢出濃度,并簡(jiǎn)單介紹最低檢測(cè)限的確定方法。

(3)企業(yè)內(nèi)部陽(yáng)性/陰性參考品符合率,陽(yáng)性/陰性參考品的組成、來源、濃度梯度設(shè)置以及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)等信息。

(4)精密度:建議詳細(xì)描述針對(duì)各種HPV基因型,采用不同來源的樣本(如人工模擬樣本和臨床樣本)在各個(gè)濃度水平進(jìn)行的精密度評(píng)價(jià)結(jié)果,可采用列表形式描述。

(5)分析特異性:建議以列表方式說明驗(yàn)證的其他HPV基因型、相關(guān)病原體等的交叉反應(yīng)性及其驗(yàn)證濃度水平。總結(jié)潛在干擾物質(zhì)的評(píng)價(jià)濃度水平及干擾情況。

(6)簡(jiǎn)要描述臨床試驗(yàn)的基本信息、試驗(yàn)方法和結(jié)論。

12.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容:

(1)如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì),應(yīng)給出生物安全性的警告。

(2)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》(衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)或現(xiàn)行有效版本)等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

(3)強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品性能僅針對(duì)聲稱的適用樣本類型及【樣本要求】項(xiàng)下說明的樣本采集和處理方法(包括樣本采集液等)進(jìn)行了驗(yàn)證,其他樣本類型或樣本采集、處理方法不能保證產(chǎn)品性能。

三、名詞解釋

1.PCR-熒光探針法

在PCR過程中利用熒光標(biāo)記的特異性探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,釋放的熒光能量的變化直接反映出PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,并通過對(duì)熒光的采集和分析以達(dá)到對(duì)原始模板量進(jìn)行分析的PCR。

2.分析特異性(Analytical Specificity)

測(cè)量程序只測(cè)量被測(cè)量物的能力。分析特異性用于描述檢測(cè)程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時(shí)只測(cè)量被測(cè)量物的能力。通常以一個(gè)被評(píng)估的潛在干擾物清單來描述,并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。

注:潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物。

3.精密度(Precision)

在規(guī)定條件下,相互獨(dú)立的測(cè)試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的測(cè)量不精密度的數(shù)字形式表示,如標(biāo)準(zhǔn)差(SD)和變異系數(shù)(CV)。

4.檢測(cè)限(Detection Limit, Limit of Detection)

樣品中以一定概率可被聲明與零有差異的被測(cè)量的最低值。

5.閾值循環(huán)數(shù)(Cycle threshold, Ct)

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過程中,反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)指數(shù)擴(kuò)增時(shí)經(jīng)歷的循環(huán)周期數(shù)。主要的計(jì)算方式是以擴(kuò)增過程前3到15個(gè)循環(huán)的熒光值的10倍標(biāo)準(zhǔn)差為閾值,當(dāng)熒光值超過閾值時(shí)的循環(huán)數(shù)則為閾值循環(huán)數(shù)(Ct)。

6.內(nèi)對(duì)照(內(nèi)標(biāo))(Internal Control)

在同一反應(yīng)管中與靶序列共同擴(kuò)增的一段非靶序列分子,其目的是鑒別儀器故障、試劑因素、聚合酶活性因素或樣本中存在抑制物等造成的結(jié)果不理想的原因。

7.意義未確定的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASC-US)

指不能肯定其形態(tài)特征及病變性質(zhì)的形態(tài)異常的鱗狀上皮細(xì)胞。

8.宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)

是一組病變的統(tǒng)稱,包括宮頸不典型增生和原位癌,為宮頸浸潤(rùn)癌的癌前期病變。此類病變?nèi)韵抻趯m頸上皮層內(nèi),未穿透基底膜,無間質(zhì)浸潤(rùn)。

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