登革病毒核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年第32號(hào)）

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登革病毒核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)登革病毒核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門(mén)審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)登革病毒核酸檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

登革熱是由登革病毒（dengue virus，DV）引起的一種急性傳染病，廣泛流行于全球熱帶及亞熱帶地區(qū)，通常由蚊媒傳播。登革病毒感染可表現(xiàn)為無(wú)癥狀隱性感染、非重癥感染及重癥感染等。典型的登革熱病程分為三期，即急性發(fā)熱期、極期和恢復(fù)期。

登革病毒屬黃病毒科黃病毒屬，為RNA病毒，基因組由單股正鏈RNA組成，共有4個(gè)血清型（DENV-1、DENV-2 DENV-3和DENV-4），4種血清型均可引起登革熱的感染和流行，各型病毒間抗原性有交叉。與寨卡病毒、乙腦病毒、西尼羅病毒等其他黃病毒抗原性有交叉。

登革病毒感染的常用的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)包括血常規(guī)、血生化檢查、病原學(xué)和血清學(xué)檢查等。核酸檢測(cè)是登革熱病原學(xué)檢測(cè)的重要參考。我國(guó)《登革熱診療指南（2014年第2版）》中，明確：患者急性發(fā)熱期可應(yīng)用登革病毒核酸檢測(cè)進(jìn)行早期診斷。疑似或臨床診斷病例，急性期血清檢測(cè)出病毒核酸，可作為確診依據(jù)。我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《登革熱診斷》（WS 216—2018），也將登革病毒RNA檢測(cè)列入登革熱病原學(xué)檢測(cè)方法，用于登革熱的早期診斷。

登革病毒核酸檢測(cè)試劑是指：利用分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，如逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）等，以登革病毒共有的核酸序列為檢測(cè)靶標(biāo)，對(duì)血液樣本中的登革病毒進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑，用于登革熱的輔助診斷。

本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于熒光探針PCR方法建立的，對(duì)于其他分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行修訂或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。

本指導(dǎo)原則適用于以登革病毒共有的靶核酸序列作為靶標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)的試劑，對(duì)于預(yù)期用途為登革病毒分型核酸檢測(cè)試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行修訂或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及國(guó)內(nèi)外同類(lèi)產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類(lèi)產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、最低檢測(cè)限及被測(cè)靶核酸序列的特性等方面寫(xiě)明申報(bào)試劑與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。若被測(cè)物為新的靶核酸序列，則應(yīng)詳細(xì)論述檢測(cè)靶標(biāo)與登革熱診斷的相關(guān)性，并提供充分的支持資料。

綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)，以下簡(jiǎn)稱(chēng)《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料的研究資料

應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、酶、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、內(nèi)對(duì)照以及企業(yè)參考品等的選擇與來(lái)源、制備過(guò)程、質(zhì)量分析和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；如主要原材料購(gòu)自其他供貨商，應(yīng)提供的資料包括：供貨商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告或性能指標(biāo)證書(shū)，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。

申請(qǐng)人應(yīng)提供企業(yè)參考品的詳細(xì)制備過(guò)程，包括組成、來(lái)源、毒株特性（如名稱(chēng)、型別、濃度）、溯源及定值資料等信息。企業(yè)參考品的項(xiàng)目應(yīng)包括：陰性參考品、陽(yáng)性參考品、最低檢測(cè)限參考品、重復(fù)性參考品等。陽(yáng)性參考品應(yīng)包含DENV-1、DENV-2 DENV-3和DENV-4型標(biāo)準(zhǔn)毒株或臨床分離株；陰性參考品則主要涉及對(duì)分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證情況；精密度參考品應(yīng)至少包含兩個(gè)濃度水平，其中包含弱陽(yáng)性水平。建議采用滅活的毒株建立企業(yè)參考品，不宜僅采用質(zhì)粒、假病毒、基因組提取/純化物等核酸。

申報(bào)試劑的質(zhì)控體系應(yīng)包含陽(yáng)性、陰性、內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）等。對(duì)樣本核酸提取/純化、配液及加樣、試劑及儀器性能、擴(kuò)增反應(yīng)抑制物（管內(nèi)抑制）、交叉污染、靶核酸降解等因素可能造成的假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果，進(jìn)行質(zhì)量控制。企業(yè)應(yīng)對(duì)各種對(duì)照的Ct值或相應(yīng)判斷數(shù)值做出明確的范圍要求。申報(bào)資料應(yīng)詳細(xì)描述對(duì)照的原料選擇、制備、定值過(guò)程等試驗(yàn)資料。

1.內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）

內(nèi)對(duì)照可對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程可能存在的擴(kuò)增反應(yīng)抑制物、儀器、試劑和操作等所導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）的目的序列設(shè)計(jì)、構(gòu)建進(jìn)行詳細(xì)的闡述，并對(duì)引物、探針和模板濃度做精確的驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽(yáng)性曲線又要盡量降低對(duì)靶核酸序列檢測(cè)造成的抑制而導(dǎo)致假陰性。

2.陽(yáng)性對(duì)照

陽(yáng)性對(duì)照可對(duì)實(shí)驗(yàn)完整過(guò)程進(jìn)行質(zhì)控。陽(yáng)性對(duì)照可為：含有靶核酸序列的病毒樣顆?；驕缁畹牡歉锊《緲?biāo)準(zhǔn)毒株或臨床分離株，濃度水平為高于最低檢測(cè)限水平的弱陽(yáng)性或中等陽(yáng)性。企業(yè)應(yīng)對(duì)各種陽(yáng)性對(duì)照的Ct值或相應(yīng)判斷數(shù)值做出明確的范圍要求。

3.陰性對(duì)照

陰性對(duì)照對(duì)可能存在的由非特異性引起的假陽(yáng)性進(jìn)行質(zhì)控。陰性對(duì)照不含待測(cè)靶序列，基質(zhì)應(yīng)盡量與待測(cè)樣本相同或相近。需參與樣本核酸的平行提取/純化。

4.空白對(duì)照（如適用）

由不含模板的緩沖液或樣本保存液組成，用于對(duì)擴(kuò)增過(guò)程中可能出現(xiàn)的外界靶核酸污染和其他升高的背景進(jìn)行質(zhì)控?？瞻讓?duì)照需參與樣本核酸的平行提取/純化。對(duì)于一些經(jīng)特殊設(shè)計(jì)的檢測(cè)試劑，可不常規(guī)設(shè)置空白對(duì)照。如：采用單管獨(dú)立反應(yīng)體系進(jìn)行檢測(cè)的試劑。此時(shí)應(yīng)詳述不進(jìn)行設(shè)置的考慮。

5.核酸提取/純化組分（如適用）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。

6.PCR組分的主要材料（包括引物、探針、各種酶及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)研究資料，主要包括以下內(nèi)容：

6.1脫氧三磷酸核苷（dNTP）

對(duì)純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的詳細(xì)資料。

6.2引物和探針

需提供靶序列選擇的研究資料；引物、探針的設(shè)計(jì)資料，包括設(shè)計(jì)原則、序列信息，設(shè)計(jì)合理性分析等，需提供對(duì)序列準(zhǔn)確性、純度、濃度、穩(wěn)定性、功能性實(shí)驗(yàn)等的詳細(xì)資料。如為外購(gòu)，還應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明。

6.3 PCR反應(yīng)所需酶

DNA聚合酶，應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性，如：94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性；應(yīng)提供有關(guān)外觀、保存穩(wěn)定性、活性及功能實(shí)驗(yàn)等的詳細(xì)資料。

逆轉(zhuǎn)錄酶，應(yīng)具有聚合酶活性，在適宜溫度條件下可進(jìn)行有效的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。應(yīng)提供有關(guān)外觀、保存穩(wěn)定性、活性及功能實(shí)驗(yàn)等的驗(yàn)證資料。

7. RNase抑制劑（如適用）

可抑制RNA酶可能造成的污染。應(yīng)提供外觀、活性及功能性試驗(yàn)的驗(yàn)證資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料
　　主要生產(chǎn)工藝包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過(guò)程應(yīng)對(duì)pH等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。
　　生產(chǎn)工藝研究資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、質(zhì)控體系設(shè)置、Ct（臨界）值確定等，提供確切的依據(jù)，主要包括以下內(nèi)容：

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示。

2.對(duì)生產(chǎn)工藝主要控制點(diǎn)進(jìn)行闡述。

3.核酸提取/純化方法確定的研究資料。

4.確定最佳PCR反應(yīng)體系的研究資料，包括酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽(yáng)離子濃度、樣本量及反應(yīng)體積等。
　　5.確定PCR反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)的研究資料。
　　6.對(duì)于基線閾值（threshold）和閾值循環(huán)數(shù)（Ct）確定的研究資料。

（四）分析性能評(píng)估資料
　　企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對(duì)申報(bào)試劑進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體的試驗(yàn)方法（操作步驟）、內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。對(duì)于登革病毒核酸檢測(cè)試劑，建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。

1.檢出能力

1.1最低檢測(cè)限的確定

建議使用DENV-1～DENV-4型培養(yǎng)后的登革病毒原液的梯度稀釋液來(lái)確定最低檢測(cè)限。應(yīng)采用與待測(cè)樣本類(lèi)型一致的樣本進(jìn)行稀釋。每個(gè)濃度梯度重復(fù)3~5份，每份進(jìn)行不少于20次的重復(fù)檢測(cè)，將具有95%陽(yáng)性檢出率的濃度作為最低檢測(cè)限。應(yīng)明確毒株的來(lái)源、濃度、濃度的確定方法和制備稀釋方法等信息。企業(yè)可采用半數(shù)組織感染量測(cè)定法（TCID50）的方法進(jìn)行毒株濃度的確認(rèn)，以TCID50/mL作為毒株濃度的表示方式；也可采用空斑形成單位（PFU）的方法進(jìn)行毒株濃度的確認(rèn)，以PFU /mL作為毒株濃度的表示方式進(jìn)行毒株濃度的確認(rèn)。

1.2最低檢測(cè)限的驗(yàn)證

在最低檢測(cè)限或接近最低檢測(cè)限濃度對(duì)DENV-1～DENV-4型登革病毒進(jìn)行驗(yàn)證。每個(gè)血清型應(yīng)至少選擇多個(gè)流行毒株進(jìn)行驗(yàn)證。企業(yè)應(yīng)能夠提供用于最低檢測(cè)限驗(yàn)證的各個(gè)毒株的來(lái)源、制備方法及濃度等信息。

1.3 申請(qǐng)人應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品最低可檢出的登革病毒拷貝數(shù)水平，并提供確定過(guò)程及相關(guān)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，本研究應(yīng)針對(duì)四種不同的血清型分別進(jìn)行確認(rèn)。

2.分析特異性

2.1交叉反應(yīng)

交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類(lèi)主要考慮以下幾方面：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀的和常見(jiàn)感染的其他病原體。具體目錄參見(jiàn)表1。

建議在病原體感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。建議進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證的細(xì)菌的最低濃度為106 CFU/mL（CFU：菌落形成單位）；進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒，如可進(jìn)行體外培養(yǎng)，其最低濃度為1×105 TCID50/mL。應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體的制備方法、來(lái)源、種屬和濃度等信息。

對(duì)于某些難以培養(yǎng)或者因?yàn)樯锇踩詿o(wú)法培養(yǎng)的病原體，可采用病原體核酸樣本進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體核酸的來(lái)源、組成和濃度等信息。采用病原體核酸樣本進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)將核酸樣本視為實(shí)際使用過(guò)程中參與PCR反應(yīng)的核酸樣本，根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)的要求配制PCR反應(yīng)體系，進(jìn)行擴(kuò)增。

有關(guān)交叉反應(yīng)驗(yàn)證的信息應(yīng)以列表的方式在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的【產(chǎn)品性能指標(biāo)】項(xiàng)中體現(xiàn)。

2.2干擾物質(zhì)

潛在的干擾物質(zhì)主要包括：內(nèi)源性物質(zhì)（如脂血、溶血、黃疸等）、抗凝劑干擾和外源性藥物。

建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(最差條件)條件下，采用包含弱陽(yáng)性樣本在內(nèi)的至少兩個(gè)登革病毒濃度水平的樣本進(jìn)行干擾研究。對(duì)于常見(jiàn)藥物干擾試驗(yàn)，建議參照相應(yīng)藥物藥代動(dòng)力學(xué)研究確定的治療藥物濃度添加相應(yīng)藥物進(jìn)行干擾驗(yàn)證。

3.精密度

測(cè)量精密度的評(píng)價(jià)方法并無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考國(guó)內(nèi)或國(guó)外的相關(guān)文件進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)申報(bào)試劑的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求。

3.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除申報(bào)試劑（包括提取/純化組分和PCR組分）本身的影響外，還應(yīng)對(duì)不同的適用機(jī)型（如PCR分析儀）、操作者、地點(diǎn)等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

3.2合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少12天的檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/運(yùn)行間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于校準(zhǔn)周期較短的試劑，如短于2個(gè)月，精密度研究時(shí)間跨度應(yīng)至少包含兩個(gè)校準(zhǔn)周期。

3.3建議采用臨床樣本或采用含有靶核酸序列的病毒樣顆粒/登革病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株（“3.3.1陰性樣本”不適用）添加至與適用樣本類(lèi)型一致的基質(zhì)中作為樣本，對(duì)至少包含陰性和弱陽(yáng)性濃度的四個(gè)濃度水平進(jìn)行驗(yàn)證：

3.3.1陰性樣本：不含待測(cè)靶物質(zhì)的樣本，陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。

3.3.2 高陰性/弱陽(yáng)性樣本（C20~C80）：濃度略低于試劑盒的陽(yáng)性判斷值，重復(fù)檢測(cè)陰性率為20%~80%。（n≥20）。

3.3.3弱陽(yáng)性樣本：濃度略高于試劑盒的陽(yáng)性判斷值，陽(yáng)性檢出率應(yīng)高于95%（n≥20）。

3.3.4中等陽(yáng)性樣本：濃度高于試劑盒的陽(yáng)性判斷值，陽(yáng)性檢出率應(yīng)100%（n≥20）。

4.核酸分離/純化性能

在進(jìn)行靶核酸檢測(cè)前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂岱蛛x/純化步驟。血清/血漿樣本經(jīng)不同的核酸分離/純化過(guò)程所獲得登革病毒核酸的純度和核酸量會(huì)有不同。因此，無(wú)論檢測(cè)試劑是否包含有核酸分離/純化的組分，申請(qǐng)人都應(yīng)結(jié)合檢測(cè)試劑的性能，對(duì)配合使用的核酸分離/純化試劑（方法）的提取效率、提取濃度和抗干擾進(jìn)行充分的驗(yàn)證。

對(duì)于說(shuō)明書(shū)中聲稱(chēng)可配合兩個(gè)或以上提取試劑或提取方法的檢測(cè)試劑。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)選定的每一種提取試劑/方法進(jìn)行驗(yàn)證，一般而言，至少包含最低檢測(cè)限和精密度的驗(yàn)證。

（五）陽(yáng)性判斷值確定資料

對(duì)于基于熒光探針PCR方法的檢測(cè)試劑，陽(yáng)性判斷值確定資料主要是指Ct值的確定資料。申請(qǐng)人應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法建立檢測(cè)試劑的陽(yáng)性判斷值。申請(qǐng)人可采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式確定申報(bào)試劑用于結(jié)果判斷的臨界值。有關(guān)ROC曲線分析的細(xì)節(jié)，請(qǐng)參考國(guó)內(nèi)外相關(guān)的文件。如存在灰區(qū)，應(yīng)提交灰區(qū)確定的詳細(xì)的研究資料。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、開(kāi)瓶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性（如適用）及凍融次數(shù)限制（如適用）等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法、接受標(biāo)準(zhǔn)、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批試劑在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

考慮到病毒RNA極易被降解的特性，企業(yè)也應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括冷藏、冷凍（如適用）和運(yùn)送條件下的有效期驗(yàn)證。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

對(duì)于樣本提取后不能立即進(jìn)行檢測(cè)的，應(yīng)明確核酸儲(chǔ)存條件、儲(chǔ)存時(shí)間等，同時(shí)應(yīng)提供相應(yīng)的核酸穩(wěn)定性研究資料，核酸樣本如可以冷凍，亦應(yīng)提交凍融次數(shù)研究資料。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說(shuō)明書(shū)【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

（七）臨床評(píng)價(jià)

1.研究方法

1.1如有同類(lèi)產(chǎn)品上市，申請(qǐng)人可選擇已上市產(chǎn)品作為參比試劑針對(duì)臨床樣本進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市產(chǎn)品等效。選擇參比試劑時(shí)，應(yīng)充分考慮其分析性能，如最低檢測(cè)限等，確保考核試劑與參比試劑具有可比性。

1.2申請(qǐng)人亦可采用核酸序列測(cè)定方法作為參比方法，驗(yàn)證考核試劑檢測(cè)結(jié)果與核酸序列測(cè)定（測(cè)序）結(jié)果之間的一致性情況。臨床研究中應(yīng)對(duì)選用的測(cè)序方法做詳細(xì)介紹，并對(duì)委托測(cè)序服務(wù)的機(jī)構(gòu)（如涉及）資質(zhì)和選擇依據(jù)作簡(jiǎn)要說(shuō)明或提供相關(guān)資料。

1.3除上述1.1/1.2比對(duì)試驗(yàn)外, 申請(qǐng)人同時(shí)應(yīng)進(jìn)行部分與病毒分離培養(yǎng)鑒定進(jìn)行比對(duì)的臨床試驗(yàn)。

1.4其他：關(guān)于1.2的測(cè)序試驗(yàn)，申請(qǐng)人應(yīng)提供以下關(guān)于測(cè)序部分的詳細(xì)試驗(yàn)資料，需有臨床試驗(yàn)單位的簽章確認(rèn)。

1.4.1測(cè)序方法原理、測(cè)序儀型號(hào)、測(cè)序試劑及消耗品的相關(guān)信息。

1.4.2測(cè)序方法所用引物相關(guān)信息，如基因區(qū)段選擇，分子量、純度、功能性實(shí)驗(yàn)等資料。引物設(shè)計(jì)應(yīng)合理涵蓋考核試劑擴(kuò)增的靶核酸區(qū)段。

1.4.3對(duì)所選測(cè)序方法的分析性能進(jìn)行合理驗(yàn)證，尤其是最低檢測(cè)限的確認(rèn)，建議將所選測(cè)序方法與申報(bào)試劑的相關(guān)性能進(jìn)行比對(duì)分析。

1.4.4測(cè)序方法應(yīng)建立合理的陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品對(duì)臨床樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

1.4.5提交有代表性的樣本測(cè)序圖譜及結(jié)果分析資料。

1.4.6提交臨床病例的確診信息，并提交測(cè)序結(jié)果和臨床確診信息的統(tǒng)計(jì)分析資料。

2. 臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇

登革熱屬于區(qū)域性傳染性疾病，建議申請(qǐng)人在相關(guān)流行病學(xué)多發(fā)區(qū)域選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，應(yīng)是經(jīng)備案的醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量應(yīng)不少于3家，且具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)計(jì)應(yīng)一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/剔除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被剔除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性，對(duì)于編盲的方式應(yīng)有詳細(xì)描述。各研究單位選用的參比試劑及試驗(yàn)儀器應(yīng)一致，以便進(jìn)行匯總統(tǒng)計(jì)分析，且嚴(yán)格遵循考核試劑/參比試劑的說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作。臨床方案中還應(yīng)明確當(dāng)二者檢測(cè)結(jié)果不一致時(shí)，第三方確認(rèn)試劑/第三方確認(rèn)方法。另外，考核試劑適用的樣本類(lèi)型等不應(yīng)超越參比試劑的相應(yīng)檢測(cè)要求，若此種情況發(fā)生，則應(yīng)選擇其他合理參比方法對(duì)額外情形進(jìn)行驗(yàn)證。

由于需采用登革血清學(xué)分型試劑，對(duì)于需要分型的病例，各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)采用統(tǒng)一的分型確認(rèn)方法。

病毒分離培養(yǎng)鑒別的方法可參考原衛(wèi)生部發(fā)布的《登革熱診斷標(biāo)準(zhǔn)》中附錄A.3“C 6/36白紋伊蚊細(xì)胞分離登革病毒”或附錄A.4“應(yīng)用乳小白鼠分離登革病毒”方法進(jìn)行病毒分離鑒定檢測(cè),各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)采用統(tǒng)一的登革病毒分離培養(yǎng)鑒定方法。

4.病例選擇及陽(yáng)性病例比例

適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC體外診斷試劑臨床性能得到準(zhǔn)確評(píng)價(jià)的必要條件。臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。根據(jù)不同的預(yù)期用途，設(shè)計(jì)相應(yīng)臨床試驗(yàn)，以輔助診斷用途為例，臨床試驗(yàn)可依據(jù)試驗(yàn)用體外診斷試劑相對(duì)于對(duì)比試劑的陰陽(yáng)性符合率分別估算最低陰陽(yáng)性樣本例數(shù)。

臨床樣本量的估算建議采用如下樣本量公式計(jì)算，

公式中，n為樣本量；Z1-α、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為試驗(yàn)用體外診斷試劑評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

其中，陰陽(yáng)性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議不低于95%。獲得臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)后，證明產(chǎn)品相對(duì)于對(duì)比方法的陰陽(yáng)性符合率（置信區(qū)間下限）不低于預(yù)設(shè)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）。當(dāng)評(píng)價(jià)指標(biāo)P接近100%時(shí)，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，如精確概率法等。

臨床試驗(yàn)應(yīng)以發(fā)熱疑似登革熱患者作為研究對(duì)象，應(yīng)以前瞻性收集樣本為主，至少包含前瞻性新鮮樣本的DEN-1型、DEN-2型，對(duì)于DEN-3型、DEN-4型陽(yáng)性病例，如較難獲得，可采用回顧性收集病例。每種型別陰、陽(yáng)性例數(shù)以及陰、陽(yáng)性符合率置信區(qū)間上下限應(yīng)當(dāng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

病毒分離培養(yǎng)應(yīng)入組一定數(shù)量的陽(yáng)性及陰性病例，考察考核試劑與病毒分離培養(yǎng)結(jié)果的一致性，納入的例數(shù)及與病毒分離培養(yǎng)對(duì)比的結(jié)果也應(yīng)當(dāng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

申請(qǐng)人還應(yīng)納入一定數(shù)量其他發(fā)熱病例、黃病毒（如有）感染病例做為干擾病例進(jìn)行臨床試驗(yàn)。應(yīng)當(dāng)在臨床試驗(yàn)方案中進(jìn)行設(shè)計(jì)，并臨床報(bào)告中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如檢測(cè)結(jié)果一致性分析、陰性/陽(yáng)性符合率等。對(duì)于本類(lèi)產(chǎn)品對(duì)比實(shí)驗(yàn)的研究，常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果有無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

干擾病例應(yīng)當(dāng)在臨床試驗(yàn)方案中進(jìn)行設(shè)計(jì)，并在臨床報(bào)告中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中，對(duì)于兩種方法檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”方法進(jìn)行復(fù)核，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。

7.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫(xiě)

根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

7.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

7.1.1臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹。

7.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。

7.1.3樣本類(lèi)型，樣本的收集、處理及保存等。

7.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

7.2具體的臨床試驗(yàn)情況

7.2.1臨床研究所用產(chǎn)品的名稱(chēng)、批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息，以及對(duì)比試驗(yàn)產(chǎn)品的注冊(cè)情況。

7.2.2對(duì)各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況進(jìn)行綜合分析，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

7.2.3質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估。

7.2.4具體試驗(yàn)過(guò)程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本保存、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。

7.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

7.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過(guò)程中是否涉及對(duì)方案的修改。

7.3.2陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率。

7.3.3以交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。

7.4討論和結(jié)論

對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無(wú)特別說(shuō)明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的有關(guān)要求，編寫(xiě)產(chǎn)品技術(shù)要求。

登革病毒核酸檢測(cè)試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陰/陽(yáng)性參考品符合率、精密度、最低檢測(cè)限等。陽(yáng)性參考品主要考察對(duì)試劑盒適用范圍內(nèi)不同血清型登革病毒的檢測(cè)能力，陰性參考品則重點(diǎn)對(duì)申報(bào)試劑的分析特異性進(jìn)行驗(yàn)證。

如果申報(bào)試劑已有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布，則申請(qǐng)人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測(cè)要求。

按照《辦法》的規(guī)定，此類(lèi)產(chǎn)品為第三類(lèi)體外診斷試劑，申請(qǐng)人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫(xiě)規(guī)范的要求。

（九）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求，境外試劑的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)一致，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求，下面對(duì)登革病毒核酸檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地編制說(shuō)明書(shū)。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1試劑盒用于體外定性檢測(cè)人血清和/或血漿樣本中的登革病毒RNA。

1.2簡(jiǎn)單介紹登革病毒核酸的類(lèi)型與結(jié)構(gòu)、病毒體的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分類(lèi)；登革病毒的傳播方式及媒介；包括哪些血清型；致病性與免疫性；感染后的臨床表現(xiàn)；流行病學(xué)及實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)手段。

1.3待測(cè)人群特征介紹：根據(jù)《登革熱診療指南》確定的疑似登革病毒感染的人群。

1.4 注意：登革疫情監(jiān)控的用途，不屬于體外診斷試劑批準(zhǔn)范圍，不得在預(yù)期用途中聲稱(chēng)。

2.【主要組成成分】

2.1說(shuō)明試劑盒包含組分的名稱(chēng)、數(shù)量、比例或濃度等信息，說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組份，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱(chēng)、貨號(hào)及其他相關(guān)信息。

2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取/純化的試劑組份，則應(yīng)在此注明經(jīng)過(guò)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸提取/純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱(chēng)以及產(chǎn)品貨號(hào)、醫(yī)療器械注冊(cè)證號(hào)等詳細(xì)信息。

3.【檢驗(yàn)原理】

3.1對(duì)試劑盒檢測(cè)的靶核酸序列進(jìn)行詳細(xì)描述（名稱(chēng)和基因位置等），對(duì)照設(shè)置及熒光信號(hào)檢測(cè)原理等進(jìn)行逐項(xiàng)介紹。

3.2核酸提取/純化方法、原理等。

3.3簡(jiǎn)要介紹試劑盒技術(shù)原理及質(zhì)控的作用機(jī)理。

4.【儲(chǔ)存條件及有效期】 

說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)封穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)明確具體的儲(chǔ)存條件及有效期。如需列明運(yùn)輸穩(wěn)定性，應(yīng)明確運(yùn)輸條件與時(shí)限。

5.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

5.1樣本的收集：明確推薦的樣本采集時(shí)間（如發(fā)病后立即進(jìn)行采樣）。樣本的取材及處理方式等若有通用的技術(shù)規(guī)范或指南，則應(yīng)遵循，并在此處引用。

5.2樣本的運(yùn)送和保存：明確保存條件及期限（短期、長(zhǎng)期）、運(yùn)送條件等。如聲稱(chēng)樣本可以凍存，還應(yīng)明確凍融次數(shù)的限制。

6.【適用儀器】所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

7.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

7.1實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度、空調(diào)氣流方向控制等注意事項(xiàng)。

7.2試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

7.3詳述待測(cè)樣本及相關(guān)對(duì)照核酸提取/純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)。

7.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

7.5 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動(dòng)化檢測(cè)程序及相關(guān)注意事項(xiàng)。

7.6儀器設(shè)置：特殊參數(shù)、結(jié)合探針的熒光素標(biāo)記情況、對(duì)待測(cè)基因及內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇。

7.7基線、循環(huán)閾值（Ct值）的選擇方法或相應(yīng)的自動(dòng)化檢測(cè)程序。

8.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）、核酸提取/純化對(duì)照（如適用）以及樣本管檢測(cè)結(jié)果的Ct值，以列表的形式對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合（如陽(yáng)性、陰性、無(wú)效）及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。明確無(wú)效結(jié)果的處理方式，如重新進(jìn)行檢測(cè)等。如存在檢測(cè)灰區(qū)，應(yīng)明確灰區(qū)的Ct值定義，并詳述對(duì)于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。

9.【檢驗(yàn)方法的局限性】

9.1本試劑僅適用于對(duì)具有相關(guān)臨床癥狀的患者進(jìn)行檢測(cè)。

9.2本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

9.3對(duì)于免疫抑制患者，應(yīng)謹(jǐn)慎解釋檢驗(yàn)結(jié)果。

9.4陰性結(jié)果不能排除登革病毒感染，對(duì)于發(fā)熱癥狀出現(xiàn)后3~6天內(nèi)采集的樣本，應(yīng)額外進(jìn)行登革病毒IgM抗體檢測(cè)，以提高檢出。

9.5陽(yáng)性結(jié)果并不表明存在感染性病毒或確定疾病癥狀是由登革病毒感染引起的。

9.6不恰當(dāng)?shù)臉颖静杉?、運(yùn)送及處理，可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果；低于最低檢測(cè)限水平的病原體核酸濃度，也可導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

9.7未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

9.8本試劑盒未進(jìn)行基于新生兒樣本的性能驗(yàn)證。

9.9登革病毒感染患者病情監(jiān)測(cè)的用途未經(jīng)驗(yàn)證。

10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)（包含但不限于）：

10.1 最低檢測(cè)限：說(shuō)明試劑的最低檢出濃度，簡(jiǎn)單介紹最低檢測(cè)限的試驗(yàn)方法及結(jié)果。

10.2精密度：精密度參考品的組成、濃度及結(jié)果。

10.3分析特異性

10.3.1交叉反應(yīng)：對(duì)出現(xiàn)在相應(yīng)臨床標(biāo)本中可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體的驗(yàn)證情況，建議以列表的方式明確經(jīng)過(guò)交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體名稱(chēng)、菌株特性、濃度等信息；

10.3.2干擾物質(zhì)：樣本中常見(jiàn)干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，包括內(nèi)源性干擾物質(zhì)和外源性干擾物質(zhì)；

10.4對(duì)比試驗(yàn)研究（如有）：簡(jiǎn)要介紹對(duì)比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

10.5境外（如適用）和境內(nèi)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)總結(jié)。

11【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

11.1有關(guān)人源組份（如有）的警告，如：試劑盒內(nèi)xx組份可能含有人源物質(zhì)，雖已經(jīng)通過(guò)了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。

11.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)，或現(xiàn)行有效版本）等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

11.3實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)接受過(guò)基因擴(kuò)增或分子生物學(xué)方法檢測(cè)的專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，具備相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作資格，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》及其他涉及到傳染性病原微生物的管理規(guī)定中的相關(guān)要求。

三、參考文獻(xiàn)

1.《登革熱診療指南（2014年第2版）》，中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，2014.10.11。

2.《登革熱診斷》，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS 216-2018）。

3. Class II Special Controls Guideline: Dengue Virus Nucleic Acid Amplification Test Reagents, Guideline for Industry and Food and Drug Administration Staff, September 2014, FDA.

四、起草單位

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。