促卵泡生成素檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年第14號）

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促卵泡生成素檢測試劑注冊技術(shù)審查
指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對促卵泡生成素檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對促卵泡生成素檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

促卵泡生成素檢測試劑用于體外定量檢測人血清、血漿、全血或其他體液樣本中促卵泡生成素（Follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）的含量。本指導(dǎo)原則適用于以酶標(biāo)記、（電）化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、（時間分辨）熒光標(biāo)記等標(biāo)記方法為捕獲抗體，以微孔板、管、磁顆粒、微珠和塑料珠等為載體包被抗體，定量檢測FSH的免疫分析試劑，不適用于以膠體金標(biāo)記的FSH定量檢測試紙條、用放射性同位素標(biāo)記的各類放射免疫或免疫放射檢測試劑。根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），促卵泡生成素檢測試劑應(yīng)按照第二類醫(yī)療器械管理，分類代號為6840。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

促卵泡生成素是由垂體前葉嗜堿性細(xì)胞合成和分泌的一種糖蛋白類促性腺激素，可通過血液循環(huán)進(jìn)入血液和尿液。像其它糖蛋白如促黃體生成素（LH）、促甲狀腺激素（TSH）和人絨毛膜促性腺激素（HCG）一樣，F(xiàn)SH由兩個以非共價鍵結(jié)合的亞單位α和β亞基組成，分子量為24 000～35 000，α-亞單位與LH、TSH和HCG結(jié)構(gòu)相似，為垂體前葉激素所共有，β-亞單位是FSH所特異的，因此，這些激素的生物學(xué)和免疫學(xué)特性的區(qū)別取決于其獨特的β亞基。對于男性，其功能是促進(jìn)睪丸曲細(xì)精管的成熟和精子的生成。對于女性，則可促進(jìn)卵泡發(fā)育和成熟，促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖，引起卵泡液分泌，并與LH協(xié)同調(diào)節(jié)和促使發(fā)育成熟的卵泡分泌雌激素和排卵，參與正常月經(jīng)的形成。

FSH的增高多見于原發(fā)性睪丸衰竭、睪丸精原細(xì)胞瘤、先天性睪丸發(fā)育不全、先天性卵巢發(fā)育不全、原發(fā)性閉經(jīng)、原發(fā)性性腺功能低下、更年期綜合征；其降低常見于席漢綜合征及長期服用性激素等。

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢出限、線性范圍、準(zhǔn)確度、參考區(qū)間及臨床適用范圍等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料作為注冊申報資料的重要組分之一，其內(nèi)容應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）

應(yīng)提供主要原材料如抗體、標(biāo)記物、固相載體、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（如適用）等的選擇、制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料。主要原材料的研究資料具體要求如下：

1.抗體的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

明確抗體的來源，如為單克隆抗體應(yīng)明確細(xì)胞株、克隆號等內(nèi)容。提供抗體靈敏度、特異性、純度、效價等基本性能的驗證資料。

抗體如為自行生產(chǎn)，提供抗體的詳細(xì)生產(chǎn)及鑒定過程。

2.校準(zhǔn)品（如適用）和質(zhì)控品（如適用）的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料。

3.申請人應(yīng)根據(jù) GB/T 21415-2008/ISO 17511:2003《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》提供所用校準(zhǔn)品的來源、明確校準(zhǔn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、賦值過程和相應(yīng)指標(biāo)以及不確定度等內(nèi)容，并提供校準(zhǔn)品的溯源性文件（如適用）。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需要提供）

應(yīng)包括以下內(nèi)容（以下內(nèi)容可根據(jù)具體的方法學(xué)特點進(jìn)行編寫）：

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以流程圖方式表示，并標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品反應(yīng)原理介紹。

3.抗體包被工藝研究：申請人應(yīng)考慮如包被抗體濃度、包被緩沖液、表面活性劑等種類及添加量（如適用）、包被時間、干燥溫度及時間（如適用）等工藝參數(shù)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標(biāo)的最佳組合。

4.抗體標(biāo)記工藝研究：申請人應(yīng)考慮標(biāo)記抗體的濃度、標(biāo)記比例等內(nèi)容。

5.反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)模式、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)（如適用）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。

6.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

7.體系中樣本及試劑的加樣方式及添加量確定：申請人應(yīng)考慮樣本加樣方式、加樣量以及試劑添加順序、添加量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的樣本及試劑的添加方式和添加量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過試驗確定樣本稀釋基質(zhì)或處理方法。確定反應(yīng)所需其他試劑用量（標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)記物、底物等）的研究資料。

8.固相載體、信號放大系統(tǒng)、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹及研究資料。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑進(jìn)行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。建議選擇不少于3批產(chǎn)品對以下分析性能進(jìn)行研究，性能評估時最好將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進(jìn)行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。具體研究方法建議參照國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進(jìn)行。

性能評估應(yīng)至少包括檢出限、準(zhǔn)確度、特異性、線性、精密度等。

對于本試劑，建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究：

1.檢出限

生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)提供促卵泡生成素試劑的空白限、檢出限及參考區(qū)間等相關(guān)信息，根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供信息，對5份濃度近似LOD的低值樣本進(jìn)行檢測，每份樣本檢測5次，對檢測結(jié)果按照大小進(jìn)行排序，符合如下條件，即可認(rèn)為生產(chǎn)企業(yè)提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理：

1.1低于生產(chǎn)企業(yè)提供的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果的數(shù)量應(yīng)小于或等于3個；

1.2無高于生產(chǎn)企業(yè)提供的參考區(qū)間下限的檢測結(jié)果的數(shù)值。

2.準(zhǔn)確度

對測量準(zhǔn)確度的評價依次包括：與國家標(biāo)準(zhǔn)品（和/或國際標(biāo)準(zhǔn)品）的相對偏差、方法學(xué)比對、回收試驗等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇以下方法的一項或幾項進(jìn)行研究。

準(zhǔn)確度可選擇如下試驗方法之一：

2.1將促卵泡生成素國家（或國際）標(biāo)準(zhǔn)品配制成試劑盒線性范圍內(nèi)高、低濃度的準(zhǔn)確度樣品（至少2個）進(jìn)行檢測，每個樣品測試3次，根據(jù)公式（1）計算相對偏差。如果3次結(jié)果都符合規(guī)定，即判為合格；如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格；如果有1次結(jié)果不符合規(guī)定，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，分別計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合規(guī)定，即判為合格；

式中：

B —相對偏差；

Xi—樣本的實測濃度均值；

T —樣本的靶值。

2.2方法學(xué)比對

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為比對方法，與擬申報試劑同時檢測一批臨床樣品（至少40例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。

用線性回歸方法對兩組結(jié)果進(jìn)行線性擬合，得到線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)（r）和斜率。計算各個樣本的待測試劑（盒）測定值與對照系統(tǒng)測定值的絕對偏差或相對偏差。

在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和比對試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行方法學(xué)比對。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。

2.3將已知濃度的促卵泡生成素樣本（A）加入到正常人血清或其他等效基質(zhì)（B）中，所加入促卵泡生成素樣本與正常人血清B之間的體積比例為1:9，根據(jù)公式（2）計算結(jié)果應(yīng)符合要求。

式中：

R--回收率；

V--加入A樣本的體積；

V0--血清樣品B的體積；

C--血清樣品加入A樣本后的檢測濃度；

C0--血清樣品B的檢測濃度；

Cs—A樣本的濃度。

回收試驗應(yīng)注意在保證總濃度在方法分析測量范圍內(nèi)，盡量使加入已知濃度的促卵泡生成素樣本（A）后樣本中的被測物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平；

3.線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床實驗樣本相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本。理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的人血清（或其他等效基質(zhì)），且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7～11個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。驗證線性范圍時可選擇5～7個濃度水平。所選用的濃度水平應(yīng)可覆蓋整個預(yù)期測定范圍并包括與臨床有關(guān)的重要評價濃度，如最小測定濃度或線性范圍的最低限、不同的醫(yī)學(xué)決定水平、最大測定濃度或線性范圍的高限等。

4.精密度

對測量精密度的評估至少應(yīng)包括2個濃度水平的質(zhì)控品，建議質(zhì)控品采用人源樣本或與人源樣本基質(zhì)接近的樣本進(jìn)行試驗，質(zhì)控品濃度都應(yīng)在試劑的測量范圍內(nèi)，包括具有臨床代表意義的低濃度值和高濃度值。

一般包括批內(nèi)精密度、批間精密度的評價。

4.1批內(nèi)精密度：在試劑的劑量-反應(yīng)曲線范圍內(nèi)，設(shè)置2～3個不同濃度的質(zhì)控品，用同一批號試劑，對不同濃度的質(zhì)控品分別重復(fù)測定10次，計算測定結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s），根據(jù)公式（3）得出變異系數(shù)（CV）。

4.2批間精密度：在3個不同批次試劑之間， 在試劑的劑量-反應(yīng)曲線范圍內(nèi)，設(shè)置2～3個不同濃度的質(zhì)控品，對不同濃度的質(zhì)控品分別重復(fù)測定10次，計算30次測定結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s），根據(jù)公式（3）得出變異系數(shù)（CV）。

5.分析特異性

5.1交叉反應(yīng):易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗原、抗體等的驗證情況，應(yīng)至少包括促黃體生成素樣本（LH）、促甲狀腺素樣本（TSH）、人絨毛膜促性腺激素樣本（HCG），交叉反應(yīng)驗證物質(zhì)的濃度應(yīng)涵蓋人體生理及病理狀態(tài)下及臨床治療過程中可能出現(xiàn)的最高濃度值。

5.2干擾物質(zhì)

5.2.1 內(nèi)源性干擾物樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如甘油三酯、膽紅素、血紅蛋白、類風(fēng)濕因子（RF）及其干擾物質(zhì)的研究。干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。

5.2.2樣本添加劑的干擾 如果試劑（盒）適用樣本類型包括血漿（或全血）樣本，應(yīng)采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿（或全血）樣本分別與血清樣本進(jìn)行對比實驗研究。方法為對比線性范圍內(nèi)的同一病人的血清和血漿（或全血）樣本，以驗證申報試劑對于血清和血漿（或全血）樣本檢測結(jié)果的一致性。

5.2.3試劑組成成分的干擾（如適用）應(yīng)考慮防腐劑對檢測結(jié)果的干擾，如氟化鈉、碘乙酸、鹽酸等。

6.HOOK效應(yīng)（如適用）

目前，促卵泡生成素檢測試劑大多采用夾心法的原理檢測樣本，考慮到方法學(xué)的缺陷，有必要對鉤狀（HOOK）效應(yīng)進(jìn)行考慮。建議采用高濃度的促卵泡生成素樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測，每個梯度的抗原樣本重復(fù)3—5份，將響應(yīng)值隨濃度升高反而變小時的濃度作為出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時促卵泡生成素抗原的最低濃度，建議產(chǎn)品說明書上明示出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時促卵泡生成素的最低濃度，或濃度達(dá)到一定數(shù)值時未發(fā)生鉤狀效應(yīng)。

7.校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的性能指標(biāo)（如適用）

參照GB/T 21415-2008《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)工作校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品的來源、賦值過程以及測量不確定度相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。同時，應(yīng)對校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的瓶內(nèi)均勻性、瓶間均勻性（凍干品適用），以及其賦值結(jié)果的準(zhǔn)確度進(jìn)行評價。如校準(zhǔn)品或質(zhì)控品的基質(zhì)不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交基質(zhì)效應(yīng)的相關(guān)研究資料。凍干型校準(zhǔn)品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差。

性能指標(biāo)的評價方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同的試劑特征進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。

8.其它需注意問題

8.1對于適用多個機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供在所有適用型號儀器上進(jìn)行的性能驗證資料。

8.2若產(chǎn)品涉及不同包裝規(guī)格且不同包裝規(guī)格間存在性能差異，則需要提供每個包裝規(guī)格在不同型號儀器上的評估資料；如已驗證不同包裝規(guī)格之間不存在性能上的差異，需要提交包裝規(guī)格間不存在性能差異的說明。

8.3不具有可比性的樣本類型（血液、尿液）應(yīng)分別進(jìn)行分析性能評估。對于血漿樣本和全血樣本，確認(rèn)最適的抗凝劑種類或明顯干擾檢測結(jié)果的抗凝劑，并在說明書樣本要求中明確。

（五）參考區(qū)間確定資料

應(yīng)提交參考區(qū)間建立或驗證時所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗資料。應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)對性別及女性卵泡期、排卵期、黃體期、絕經(jīng)期進(jìn)行分組研究，例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求，女性樣本入組時生理周期的確定依據(jù)應(yīng)科學(xué)合理。建議參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品參考區(qū)間確定的文件。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

前者主要包括長期穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等研究，如組分為凍干粉，應(yīng)有復(fù)溶穩(wěn)定性研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，應(yīng)提供相應(yīng)穩(wěn)定性試驗研究資料。

后者主要包括冷藏和冷凍條件下的有效性驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進(jìn)行穩(wěn)定性驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的保存穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床評價資料

根據(jù)《關(guān)于公布新修訂免于進(jìn)行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號），促卵泡生成素檢測試劑可免于進(jìn)行臨床試驗，申請人可依照《免于進(jìn)行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》開展評價。申請人如無法或不適于按照上述要求對產(chǎn)品進(jìn)行臨床評價，則應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求開展臨床試驗。下面僅對臨床試驗中的基本問題進(jìn)行闡述。

對于進(jìn)行臨床試驗的產(chǎn)品，臨床試驗總體要求及臨床試驗資料的內(nèi)容應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》、《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）和《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。

以下僅根據(jù)促卵泡生成素檢測試劑的特點對其臨床試驗中應(yīng)重點關(guān)注的內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.臨床試驗研究方法

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行同步盲法對比試驗，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)、溯源性、參考區(qū)間、線性范圍等相同的同類試劑作為對比試劑。如方法學(xué)不同，則應(yīng)首選方法學(xué)性能較高的對比試劑進(jìn)行臨床試驗。

2.臨床試驗機(jī)構(gòu)的選擇

2.1第二類產(chǎn)品申請人應(yīng)當(dāng)選定不少于2家（含2家）有資質(zhì)的臨床試驗機(jī)構(gòu)開展臨床試驗。

2.2臨床試驗機(jī)構(gòu)應(yīng)有能力提供臨床試驗所需的各類樣本，實驗操作人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和對比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床試驗機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法及樣本隨機(jī)分配以保證試驗結(jié)果的客觀性。試驗方案中還應(yīng)明確兩種試劑檢測結(jié)果不一致的判定依據(jù)，以及結(jié)果不一致樣本復(fù)核的方法。各臨床試驗機(jī)構(gòu)選用的對比試劑應(yīng)一致，對比試劑的適用機(jī)型應(yīng)評估一致性后選用，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，考核試劑的樣本類型不應(yīng)超越對比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了對比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)進(jìn)行不同樣本類型之間的臨床對比驗證試驗。

4.研究對象選擇

4.1對于不具有可比性的樣本類型，每種樣本類型臨床試驗的總樣本數(shù)至少為200例。對于聲稱同時適用于血清、血漿、全血樣本，且樣本類型不超出對比試劑對樣本類型的檢測要求，除完成一個樣本類型不少于200例的臨床研究外，還應(yīng)進(jìn)行兩兩樣本類型相關(guān)性研究以確認(rèn)其檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系），其例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。建議參考《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》中增加樣本類型的變更要求。

4.2應(yīng)考慮樣本量的分布，各臨床試驗機(jī)構(gòu)樣本量和樣本分布應(yīng)相對均衡。

4.3樣本濃度應(yīng)覆蓋考核試劑檢測范圍，盡可能均勻分布。盡可能使不少于30%樣本的測定值處于參考區(qū)間以外，但在檢測范圍內(nèi)。

4.4應(yīng)明確臨床樣本的采集要求。

4.4.1應(yīng)明確抗凝劑的要求（如適用），對檢測結(jié)果有明顯干擾作用的樣本，如高脂、溶血、黃疸的樣本盡量避免使用。建議在臨床試驗中選擇部分易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的樣本，如早孕、甲減等相關(guān)疾病的樣本，以從臨床角度驗證試劑的特異性。

4.4.2試驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。另外需要關(guān)注對比試劑說明書中對樣本的相關(guān)要求，臨床試驗用的樣本需同時滿足考核試劑和對比試劑的相關(guān)要求。

5.倫理學(xué)要求

臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗機(jī)構(gòu)倫理委員會的同意。研究者應(yīng)考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結(jié)果對受試者的風(fēng)險性，應(yīng)提交倫理委員會的審查意見及受試者的知情同意書。對于例外情況，如客觀上不可能獲得受試者的知情同意或該臨床試驗對受試者幾乎沒有風(fēng)險，可經(jīng)倫理委員會審查和批準(zhǔn)后免于受試者的知情同意。

6.統(tǒng)計學(xué)分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，對于比對試驗的等效性研究，最常用是對考核試劑和對比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及回歸分析，用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是對比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。

結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果是否存在明顯統(tǒng)計學(xué)差異。

7.結(jié)果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”或其他合理的方法進(jìn)行復(fù)核，以便對臨床試驗結(jié)果進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)詳細(xì)說明理由。

8.臨床試驗總結(jié)報告撰寫

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。

9.討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床試驗有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料

申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品生命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進(jìn)行風(fēng)險分析，應(yīng)符合YY/T 0316-2016 《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局局令第5號）和《國家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。

1.適用的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)

注：以上標(biāo)準(zhǔn)如有修訂，以最新發(fā)布版本為準(zhǔn)

2.主要性能指標(biāo)

作為定量檢測試劑，應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、檢出限、準(zhǔn)確度、線性、精密度（批內(nèi)精密度、批間精密度）、特異性、穩(wěn)定性等。技術(shù)要求應(yīng)不低于現(xiàn)行的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》的要求，應(yīng)提供具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機(jī)構(gòu)出具的產(chǎn)品注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。應(yīng)采用國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行注冊檢驗。如有相應(yīng)的國家法規(guī)發(fā)布或更新，按其要求執(zhí)行。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗原理、檢驗方法、檢驗結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第6號）、《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

以下內(nèi)容僅對促卵泡生成素檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫。

產(chǎn)品說明書內(nèi)容原則上應(yīng)全部用中文進(jìn)行表述；如含有國際通用或行業(yè)內(nèi)普遍認(rèn)可的英文縮寫，可用括號在中文后標(biāo)明；對于確實無適當(dāng)中文表述的詞語，可使用相應(yīng)英文或其縮寫。

1.【產(chǎn)品名稱】

1.1試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。檢驗的方法或者原理應(yīng)明確到細(xì)分的具體方法學(xué)，如：促卵泡生成素測定試劑（磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法）。

2.【包裝規(guī)格】

如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機(jī)型，應(yīng)同時明確適用機(jī)型

3.【預(yù)期用途】

3.1試劑盒用于定量檢測人×××樣本中的促卵泡生成素。其中，×××應(yīng)寫明適用的樣本類型為血清、血漿全血還是尿液，上述內(nèi)容均應(yīng)有相應(yīng)的分析性能評估資料和（或）臨床評價資料支持。

3.2與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。

4.【檢驗原理】

應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分詳細(xì)說明檢驗原理、方法，必要時可采用圖示方法描述

5.【主要組成成分】

5.1說明試劑盒包含組成、數(shù)量、濃度或含量等信息。

5.2建議對所包被抗體的相關(guān)信息進(jìn)行簡單介紹。

5.3對于校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（如適用）：

5.3.1注明校準(zhǔn)品的定值及其溯源性，溯源性資料應(yīng)寫明溯源的最高級別（應(yīng)包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考方法的發(fā)布單位及編號）。

5.3.2應(yīng)明確說明質(zhì)控品的生物學(xué)來源、活性及其他特性，應(yīng)明確靶值范圍（如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單）。

5.4對于多組分試劑應(yīng)明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換，如可互換，則需提供相應(yīng)的性能驗證資料。

5.5對于產(chǎn)品中不包含，但對該試驗必需的試劑組分，說明書中應(yīng)列出此類試劑的名稱、純度，提供稀釋或混合方法及其他相關(guān)信息。

6.【儲存條件及有效期】

6.1對試劑的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性（如適用）、復(fù)溶穩(wěn)定性（如適用）、凍融次數(shù)限制（如適用）等信息作詳細(xì)介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。

6.2不同組分保存條件及有效期不同時，應(yīng)分別說明，產(chǎn)品總有效期以其中效期最短的為準(zhǔn)。

注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。

6.3生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期

7.【適用儀器】

7.1如適用儀器為通用型的酶標(biāo)儀則需給出配置波長的要求。

7.2如適用儀器為非通用的儀器則需寫明具體適用儀器的型號，不能泛指某一系列儀器，并且與分析性能評估資料一致。

8.【樣本要求】重點明確以下內(nèi)容：

8.1明確本產(chǎn)品適用的樣本類型，血液樣本應(yīng)當(dāng)說明對采血管及抗凝劑的要求，其他樣本應(yīng)說明樣本采集、處理及保存方式。

8.2樣本采集：采集時間點是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，盡量減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對實驗造成的影響。

8.3樣本處理、運送及保存：明確樣本處理方法、樣本的保存條件及期限（短期、長期）等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)的要求。

9.【檢驗方法】詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟

9.1試驗環(huán)境：溫、濕度條件及樣本復(fù)溫等要求。

9.2試劑使用方法、注意事項，試劑開封后注意事項等。

9.3待測樣本的預(yù)處理方法、步驟及注意事項。

9.4明確樣本檢測的操作步驟。

9.5校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、校準(zhǔn)曲線的繪制方法。對需專用儀器的產(chǎn)品，應(yīng)注明推薦的儀器校準(zhǔn)周期。

9.6質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

9.7結(jié)果計算：對于手工/半自動儀器，說明校準(zhǔn)曲線擬合方式及結(jié)果計算方法。

10.【參考區(qū)間】

應(yīng)按照不同性別及女性生理周期，分別說明常用樣本類型的參考區(qū)間，并簡要說明參考區(qū)間的確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗結(jié)果的解釋】

11.1應(yīng)對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。

11.2明確有可能存在引起樣本濃度升高及降低因素，并說明在何種條件下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗，以及在確認(rèn)試驗時，對待測樣本可能采取的優(yōu)化條件等進(jìn)行詳述。

11.3如樣本濃度超出線性范圍后，若申請人聲稱樣本可可稀釋后檢測，應(yīng)明確樣本最大可稀釋倍數(shù)及稀釋液種類。

12.【檢驗方法局限性】至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：

12.1本試劑的檢測結(jié)果僅供參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據(jù)，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

12.2干擾物質(zhì)及鉤狀效應(yīng)（如適用）對檢測結(jié)果的影響。明確干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度，不應(yīng)使用模糊的描述方式。明示出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時促卵泡生成素的最低濃度，或濃度達(dá)到一定數(shù)值時未發(fā)生鉤狀效應(yīng)。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

至少應(yīng)包括：檢出限、線性、準(zhǔn)確度、精密度（批內(nèi)精密度、批間精密度）、特異性。

14.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

14.1如使用冰箱中冷藏保存的檢測試劑建議檢測前應(yīng)從冰箱內(nèi)取出，恢復(fù)至室溫再打開使用，否則會影響檢測結(jié)果。

14.2有關(guān)試驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。

14.3采用不同廠家及不同方法學(xué)的試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告中注明所用試劑特征（如參考區(qū)間或方法學(xué)）。

14.4有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑內(nèi)質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了HBsAg、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。提示對于潛在傳染源的處理方式。

14.5對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都視為傳染源進(jìn)行處理。

14.6對于動物源性組分，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

三、審查關(guān)注點

（一）技術(shù)要求中性能指標(biāo)的設(shè)定及檢驗方法是否符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求；技術(shù)要求的格式是否符合《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。

（二）FSH預(yù)期值呈現(xiàn)性別、女性不同生理周期差異，在參考區(qū)間的確立/驗證過程中是否予以體現(xiàn)，樣本生理周期確定的依據(jù)是否科學(xué)合理。

（三）試劑（盒）的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說明書聲稱一致。

（四）FSH被測物質(zhì)在體內(nèi)有同功異構(gòu)結(jié)構(gòu)，臨床試驗對比試劑盡可能選擇與考核試劑具有相同溯源性的。臨床試驗采用的樣本類型及病例是否滿足試劑（盒）聲稱的預(yù)期用途，樣本量及臨床研究單位的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。

（五）由于促卵泡生成素與促黃體生成素（LH）、促甲狀腺激素（TSH）、人絨毛膜促性腺激素（HCG）結(jié)構(gòu)類似，建議臨床試驗過程中可適當(dāng)入組一些早孕及甲減等疾病的樣本。

（六）說明書中預(yù)期用途、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標(biāo)等描述應(yīng)分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、參考區(qū)間研究資料、分析性能評估資料的研究結(jié)論相一致。

（七）定量熒光免疫層析的產(chǎn)品可根據(jù)產(chǎn)品方法學(xué)特點選取適宜的試驗方法進(jìn)行試驗。

四、參考文獻(xiàn)

（一）馮仁豐，《臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)》，第二版，上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2007年4月

（二）尚紅，王毓三，申子瑜.《全國臨床檢驗操作規(guī)程》，第四版，人民衛(wèi)生出版社，2015年3月第1版

（三）How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory;Approved Guideline，Second Edition 2000，CLSI/NCCLS C28-A2

（四）Method Comparison And Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline，Second Edition 2002，CLSI/NCCLS EP9-A2

五、編制單位

天津市醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。