促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2017年第213號(hào)）

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促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則的編寫目的是指導(dǎo)和規(guī)范促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)過(guò)程中審查人員對(duì)注冊(cè)資料的技術(shù)審評(píng)，同時(shí)也可指導(dǎo)申請(qǐng)人的產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)。

本指導(dǎo)原則是對(duì)促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于采用雙抗體夾心膠體金免疫層析技術(shù)原理對(duì)人體尿液中促黃體生成素進(jìn)行定性或半定量體外檢測(cè)的產(chǎn)品。

根據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號(hào)），促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）屬于二類醫(yī)療器械，分類代碼為6840。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

促黃體生成素（Luteinizing Hormone）是促性腺激素的一種糖蛋白激素，簡(jiǎn)稱促黃體生成素，亦稱促間質(zhì)細(xì)胞激素（ICSH）。是由腦垂體前葉嗜堿性細(xì)胞分泌的一種大分子糖蛋白，由α和β兩個(gè)亞基非共軛結(jié)合形成，其中β亞基具有決定其分子特異性的構(gòu)型特征，可以識(shí)別適當(dāng)?shù)陌薪M織，并與特定的受體結(jié)合，進(jìn)而發(fā)揮其生理功能，主要作用是刺激卵巢內(nèi)成熟卵子的釋放。正常女性體內(nèi)保持有微量的促黃體生成素，在月經(jīng)中期促黃體生成素激素的分泌量快速增加，形成一個(gè)“促黃體生成素峰”，并在此后24—60小時(shí)內(nèi)刺激卵巢內(nèi)成熟卵的釋放。因此，“促黃體生成素峰”前后1—3天內(nèi)婦女最易受孕。

1.預(yù)期用途：通過(guò)定性或半定量檢測(cè)女性尿液中促黃體生成素的水平，以預(yù)測(cè)排卵時(shí)間，用于指導(dǎo)育齡女性選擇最佳受孕時(shí)機(jī)或指導(dǎo)安全期避孕。

2.產(chǎn)品描述

2.1產(chǎn)品原理：本試劑運(yùn)用雙抗體夾心膠體金免疫層析技術(shù)定性或半定量檢測(cè)人體尿液中的促黃體生成素。檢測(cè)時(shí)，當(dāng)待測(cè)樣本中的促黃體生成素濃度等于或高于臨界值時(shí)，將與膠體金標(biāo)記的抗β-促黃體生成素單克隆抗體反應(yīng)形成復(fù)合物，在層析作用下反應(yīng)復(fù)合物沿著硝酸纖維素膜向前移動(dòng)，被硝酸纖維素膜上檢測(cè)區(qū)（T）預(yù)先包被的抗α-促黃體生成素單克隆抗體捕獲，最終在檢測(cè)區(qū)（T）有紅色條帶出現(xiàn)即為陽(yáng)性，提示“促黃體生成素峰”出現(xiàn)。當(dāng)待測(cè)樣本中促黃體生成素濃度低于臨界值時(shí)，在檢測(cè)區(qū)（T）形成一條顏色淺于質(zhì)控區(qū)（C）的紅色反應(yīng)線或無(wú)紅色反應(yīng)線出現(xiàn)，此時(shí)檢測(cè)結(jié)果為陰性，表示非“促黃體生成素峰”。無(wú)論待測(cè)樣本中是否含有促黃體生成素，質(zhì)控區(qū)（C）都會(huì)形成一條肉眼可見(jiàn)的紅色反應(yīng)線，這是判斷樣本量是否足夠、層析過(guò)程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也作為本試劑的內(nèi)控。

膠體金法半定量試劑的顯示指示系統(tǒng)則是在此基礎(chǔ)上，對(duì)結(jié)果判斷的方法有所不同。半定量試劑主要是通過(guò)樣本檢測(cè)線的實(shí)際色度與試劑盒配套的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)線色度卡進(jìn)行色度對(duì)比，記錄相應(yīng)的色度數(shù)值，繪制促黃體生成素曲線，從而得到使用者自己的“促黃體生成素峰”值。

2.2主要原材料及來(lái)源：應(yīng)明確產(chǎn)品主要原材料（如所用抗體，硝酸纖維素膜）的生產(chǎn)廠家和純度級(jí)別。

2.3工藝流程：生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)詳細(xì)明確產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝流程，明確工藝流程中的關(guān)鍵工藝、特殊過(guò)程，明確需在潔凈環(huán)境中生產(chǎn)的工藝以及對(duì)應(yīng)的環(huán)境級(jí)別。

3.有關(guān)生物安全性的說(shuō)明：人源性材料須對(duì)有關(guān)傳染?。℉IV、HBV、HCV、TP等）病原體檢測(cè)予以說(shuō)明，并提供相關(guān)的證明文件。其他動(dòng)物源及微生物來(lái)源的材料，應(yīng)當(dāng)提供相應(yīng)的說(shuō)明文件，證明其在產(chǎn)品運(yùn)輸、使用過(guò)程中對(duì)使用者和環(huán)境是安全的，并對(duì)上述原材料所采用的滅活等試驗(yàn)方法予以說(shuō)明。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)：總結(jié)主要原材料研究、主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究、分析性能的評(píng)估及產(chǎn)品穩(wěn)定性研究等驗(yàn)證的情況。

5.同類產(chǎn)品上市情況介紹。

包括同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況。相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品與國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。對(duì)于新研制的體外診斷試劑產(chǎn)品，需要提供被測(cè)物與預(yù)期適用的臨床適應(yīng)證之間關(guān)系的文獻(xiàn)資料。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

1.試劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗(yàn)資料。如抗體為申請(qǐng)人自制，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定，應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來(lái)源，申請(qǐng)人對(duì)該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價(jià)等），確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)；若購(gòu)買，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)；應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來(lái)源，外購(gòu)方名稱，提交外購(gòu)方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書(shū)，詳述申請(qǐng)人對(duì)該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請(qǐng)人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。

2.其他主要原輔料的選擇及驗(yàn)證資料，如硝酸纖維素膜/醋酸纖維膜、膠體金、反應(yīng)緩沖液、在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料（如：牛血清白蛋白等），申請(qǐng)人應(yīng)詳述每一原輔料技術(shù)指標(biāo)的要求以及確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。若為外購(gòu)，應(yīng)詳述每一原輔料的外購(gòu)方名稱并提交外購(gòu)方出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書(shū)。應(yīng)參照《金標(biāo)類檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則》（食藥監(jiān)辦械函〔2013〕3號(hào)）原材料質(zhì)量控制的內(nèi)容進(jìn)行相關(guān)研究。

3.企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值過(guò)程及試驗(yàn)資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。企業(yè)應(yīng)采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量的生產(chǎn)工藝。

2.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

3.抗體包被工藝研究，申請(qǐng)人應(yīng)考慮如包被液量、濃度、時(shí)間等指標(biāo)對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)試驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。

4.實(shí)驗(yàn)體系反應(yīng)條件確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、膜孔徑大小（或移行速度）等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)試驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

5.體系中反應(yīng)時(shí)間的確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮產(chǎn)品加樣端浸入樣本液時(shí)間、樣本加樣后觀察時(shí)間對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果的影響，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣時(shí)間、觀察時(shí)間。

6.半定量產(chǎn)品可包括比色卡的相關(guān)生產(chǎn)內(nèi)容。

（四）分析性能評(píng)估資料

企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體研究方法、內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。對(duì)于促黃體生成素檢測(cè)試劑，建議著重對(duì)以下性能進(jìn)行分析研究。

1.定性產(chǎn)品

1.1臨界值的確定

用空白對(duì)照液和含有10mIU/mL、25mIU/mL、50mIU/mL促黃體生成素標(biāo)準(zhǔn)品的樣品液分別測(cè)定同批號(hào)試紙，每個(gè)濃度測(cè)定3條，結(jié)果顯示臨界值應(yīng)為25mIU/mL。

1.2分析特異性

1.2.1交叉反應(yīng)

用于促黃體生成素定性檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)驗(yàn)證的激素種類及濃度主要考慮為：200mIU/mL的促卵泡激素（FSH）標(biāo)準(zhǔn)品樣品液和250μIU/mL的促甲狀腺素（TSH）標(biāo)準(zhǔn)品樣品液。

1.2.2干擾物質(zhì)

潛在的干擾物質(zhì)主要包括：乳糜尿、血尿、膽紅素陽(yáng)性、渾濁的尿液以及相關(guān)藥物。

1.3陽(yáng)性/陰性參考品

企業(yè)內(nèi)部陽(yáng)性/陰性參考品應(yīng)可溯源到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品。

1.4.鉤狀（HOOK）效應(yīng)

目前，促黃體生成素檢測(cè)試劑大多采用夾心法的原理檢測(cè)樣本，考慮到方法學(xué)的缺陷，有必要對(duì)鉤狀（HOOK）效應(yīng)進(jìn)行考慮，如圖1所示。

建議采用高濃度的促黃體生成素抗原參考品進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開(kāi)始檢測(cè)，每個(gè)梯度的抗原稀釋液重復(fù)3—5份，將顯色深度隨濃度升高反而變淺時(shí)的濃度作為出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)促黃體生成素抗原的最低濃度，建議產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上明示出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)促黃體生成素抗原的最低濃度。

1.5重復(fù)性

建議選取包括臨界值在內(nèi)的多個(gè)濃度樣品進(jìn)行多次檢測(cè)，不同濃度樣本的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)一致，顯色度應(yīng)均一。在分析試劑重復(fù)性時(shí)，不應(yīng)使用強(qiáng)陽(yáng)性樣品或明顯陰性的樣品，否則無(wú)法客觀地評(píng)價(jià)其檢測(cè)效果。

1.6批間差

建議選取臨界值附近的樣品，用三個(gè)批號(hào)的促黃體生成素檢測(cè)試劑，每個(gè)批號(hào)抽取相同數(shù)量，按照說(shuō)明書(shū)步驟操作，對(duì)重復(fù)性進(jìn)行檢測(cè)，三個(gè)批號(hào)的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)一致，顯色度均一。

1.7人抗鼠抗體（HAMA）效應(yīng)

如果用到的抗體來(lái)源為鼠抗，則應(yīng)考慮人抗鼠抗體（HAMA）效應(yīng)。鼠源性單抗對(duì)人體具有異種蛋白的免疫原性，在人體內(nèi)半衰期較短，多次使用可引起人抗鼠抗體（HAMA）的產(chǎn)生，從而使其應(yīng)用受到限制。

注：可參考文件EP7-A2《臨床生化干擾測(cè)試》。

1.8校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值（如涉及）

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗(yàn)資料和溯源性文件等。應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計(jì)算記錄，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

1.9其他需要注意的問(wèn)題

如注冊(cè)申請(qǐng)中包括不同適用機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上進(jìn)行上述項(xiàng)目評(píng)估的試驗(yàn)資料及總結(jié)。

如注冊(cè)申請(qǐng)中包含不同的包裝規(guī)格，需要對(duì)不同包裝規(guī)格之間的差異進(jìn)行分析或驗(yàn)證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個(gè)包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行的上述項(xiàng)目評(píng)估的試驗(yàn)資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說(shuō)明，具體說(shuō)明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

2.半定量產(chǎn)品

建議申報(bào)產(chǎn)品至少具備以下性能指標(biāo)，具體指標(biāo)要求及實(shí)驗(yàn)方法則由申報(bào)單位根據(jù)自己產(chǎn)品的特性制定及驗(yàn)證。

2.1準(zhǔn)確度。

2.2最低檢出量。

2.3重復(fù)性。

2.4批間差。

2.5特異性（應(yīng)包括尿液的本底影響）。

2.6校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值（如涉及）。

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗(yàn)資料和溯源性文件等。半定量產(chǎn)品所用到的標(biāo)準(zhǔn)比色卡，應(yīng)提供相應(yīng)的溯源性資料。

2.7其他需要注意的問(wèn)題

（五）陽(yáng)性判斷值或參考區(qū)間確定資料

應(yīng)當(dāng)詳細(xì)說(shuō)明陽(yáng)性判斷值確定的方法或依據(jù)，說(shuō)明確定陽(yáng)性判斷值所采用的樣本來(lái)源，并提供陽(yáng)性判斷值確定的詳細(xì)試驗(yàn)資料及總結(jié)。半定量產(chǎn)品則應(yīng)根據(jù)醫(yī)學(xué)上促黃體生成素的不同分泌期分別進(jìn)行參考區(qū)間的研究。

應(yīng)明確研究采用的樣本來(lái)源、詳細(xì)的試驗(yàn)資料、統(tǒng)計(jì)方法等。參考值范圍可參考公認(rèn)的權(quán)威資料/臨床比對(duì)試劑，但應(yīng)當(dāng)進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證樣本數(shù)量應(yīng)不低于120例。不同樣本類型（隨機(jī)尿、晨尿等）應(yīng)分別進(jìn)行研究。

研究結(jié)論應(yīng)與產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容：考核試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及開(kāi)封穩(wěn)定性（如涉及）等研究，樣本穩(wěn)定性則應(yīng)考慮尿液標(biāo)本的受影響因素，如收集尿液的時(shí)間、方法、類型（隨機(jī)尿、晨尿等）、不同促黃體生成素的分泌期、飲水等諸多影響因素。申請(qǐng)人可根據(jù)自身產(chǎn)品的實(shí)際情況需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案并進(jìn)行驗(yàn)證。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批成品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

（七）臨床評(píng)價(jià)資料

臨床評(píng)價(jià)資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）要求，同時(shí)研究資料的形式應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2014年第44號(hào)）臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。下面僅對(duì)臨床試驗(yàn)中的基本問(wèn)題進(jìn)行闡述。

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能不低于考核試劑、預(yù)期用途一致的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明考核試劑與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床研究單位的選擇

2.1第二類產(chǎn)品申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)選定不少于2家（含2家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照有關(guān)規(guī)定開(kāi)展臨床試驗(yàn)。

2.2臨床試驗(yàn)樣品的生產(chǎn)應(yīng)當(dāng)符合醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系的相關(guān)要求。

3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。臨床研究方案應(yīng)符合倫理學(xué)的相關(guān)要求。各研究單位選用的對(duì)比試劑應(yīng)一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，考核試劑的樣本類型不應(yīng)超越對(duì)比試劑對(duì)樣本類型的檢測(cè)要求，如果選擇了對(duì)比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)采用其他方式進(jìn)行驗(yàn)證。

各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。

4.研究對(duì)象的選擇

4.1臨床試驗(yàn)樣本量的確定：申請(qǐng)人/臨床研究者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品臨床使用目的，與該產(chǎn)品相關(guān)疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。在符合指導(dǎo)原則有關(guān)最低樣本量要求的前提下，還應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

4.1.1臨床試驗(yàn)的總樣本數(shù)至少為200例。

4.1.2應(yīng)考慮樣本量的分布。樣本量的選擇應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)及相關(guān)指導(dǎo)原則的要求。半定量產(chǎn)品所選樣本則應(yīng)在促黃體生成素醫(yī)學(xué)不同分泌期內(nèi)均勻分布。

4.1.3入選樣本應(yīng)包含陽(yáng)性、陰性樣本，樣本應(yīng)盡可能均勻分布，盡可能收集/獲取臨界值的樣本，并考慮弱陽(yáng)性樣本。其中，不低于25 mIU/mL的樣本應(yīng)不少于總樣本的30%。

4.2應(yīng)明確臨床樣本的采集要求。

4.2.1盡可能采用新鮮樣品，避免貯存。

4.2.2明確具體的收集樣本的方法、時(shí)間等要求。

4.2.3對(duì)檢測(cè)結(jié)果有明顯干擾作用的樣本，如乳糜尿、血尿、膽紅素陽(yáng)性或渾濁的尿液樣本盡量避免使用。

4.3試驗(yàn)方案中應(yīng)確定病例或樣本納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，已經(jīng)入選的病例或樣本再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。

4.4變更事項(xiàng)相關(guān)的臨床試驗(yàn)：涉及產(chǎn)品檢測(cè)條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項(xiàng)，產(chǎn)品臨床試驗(yàn)總樣本數(shù)至少為100例，并在至少2家（含2家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)；變更抗原、抗體等主要原材料的供應(yīng)商、陽(yáng)性判斷值或參考區(qū)間的變化及增加臨床適應(yīng)證等變更事項(xiàng)，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗(yàn)總樣本數(shù)。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，即考核試劑與對(duì)比試劑基本等效。

5.1定性試劑

應(yīng)分析考核試劑的陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率、考核試劑和對(duì)比試劑的一致性（如kappa值）以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。

5.2半定量試劑

應(yīng)分析考核試劑的陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率，并按照促黃體生成素不同的分泌期對(duì)樣本的檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行匯總，采用合理的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)其進(jìn)行分析，以驗(yàn)證考核試劑與對(duì)比試劑整體檢測(cè)不同分泌期促黃體生成素樣本時(shí)結(jié)果的等效性（如R×C卡方分析）。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中，對(duì)兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”或其他合理的方法進(jìn)行復(fù)核，以便對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。如無(wú)需復(fù)核，應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明理由。同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

對(duì)體外診斷試劑產(chǎn)品生命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見(jiàn)的危害等方面的判定以及對(duì)患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)和相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制基礎(chǔ)上，形成風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告。應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。主要參考YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》。風(fēng)險(xiǎn)管理活動(dòng)要貫穿產(chǎn)品設(shè)計(jì)、生產(chǎn)、上市后使用及產(chǎn)品處理的整個(gè)生命周期。要體現(xiàn)申請(qǐng)人風(fēng)險(xiǎn)管理活動(dòng)計(jì)劃的完整性，尤其上市管理的風(fēng)險(xiǎn)分析與評(píng)價(jià)過(guò)程。對(duì)于上市前風(fēng)險(xiǎn)管理中尚未認(rèn)知的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)在上市后開(kāi)展信息收集，一旦發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)，采取控制措施，更新風(fēng)險(xiǎn)管理文件。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、前期臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法。

下面就目前與促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）相關(guān)的常用文件和主要性能指標(biāo)等相關(guān)內(nèi)容做簡(jiǎn)要敘述。

1.產(chǎn)品適用的相關(guān)文件：

GB/T 18990—2008 《促黃體生成素檢測(cè)試紙（膠體金免疫層析法）》

注：以上標(biāo)準(zhǔn)使用最新版本。

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)關(guān)注相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的有效性。申請(qǐng)人亦可根據(jù)自身產(chǎn)品的特點(diǎn)補(bǔ)充引用其他標(biāo)準(zhǔn)。

2.主要技術(shù)指標(biāo)

本章列舉了促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）的基本技術(shù)指標(biāo)，企業(yè)可參考相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)企業(yè)自身產(chǎn)品的技術(shù)特點(diǎn)和用途制定相應(yīng)的性能指標(biāo)。技術(shù)要求應(yīng)包括但不限于以下內(nèi)容：

2.1定性產(chǎn)品

2.1.1物理性狀

a.外觀

應(yīng)整潔完整、無(wú)毛刺、無(wú)破損、無(wú)污染；材料附著牢固。

b.寬度

寬度應(yīng)≥2.5mm。

c.移行速度

液體移行速度應(yīng)不低于10mm/min。

2.1.2臨界值

用空白對(duì)照液和含有10mIU/mL、25mIU/mL、50mIU/mL 促黃體生成素標(biāo)準(zhǔn)品的樣品液分別測(cè)定同批號(hào)試紙，每個(gè)濃度測(cè)定3條，結(jié)果顯示臨界值應(yīng)為25mIU/mL。

注：該產(chǎn)品有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品。

2.1.3特異性

a.與促卵泡激素（hFSH）的交叉反應(yīng)

檢測(cè)濃度為200 mIU/mL的FSH標(biāo)準(zhǔn)品樣本液，結(jié)果應(yīng)均為陰性。

b.與促甲狀腺激素（hTSH）的交叉反應(yīng)

檢測(cè)濃度為250μIU/mL的TSH標(biāo)準(zhǔn)品樣本液，結(jié)果應(yīng)均為陰性。

2.1.4重復(fù)性

用濃度依次為10mIU/mL、25mIU/mL和50mIU/mL的促黃體生成素樣品液，分別測(cè)定同批號(hào)試紙，每個(gè)濃度測(cè)定10次，每個(gè)濃度的反應(yīng)結(jié)果應(yīng)一致，顯色應(yīng)均一。

2.1.5穩(wěn)定性

在37℃放置20天后，分別檢測(cè)2.1—2.4項(xiàng)，結(jié)果應(yīng)符合各項(xiàng)目的要求。

2.1.6批間差

取三個(gè)批號(hào)的促黃體生成素試紙，檢測(cè)濃度為25mIU/mL的促黃體生成素樣品液，反應(yīng)結(jié)果應(yīng)一致，顯色應(yīng)均一。

2.2半定量產(chǎn)品

建議申報(bào)產(chǎn)品的性能應(yīng)不低于以下指標(biāo)及實(shí)驗(yàn)方法，具體要求及方法由申報(bào)單位根據(jù)自身產(chǎn)品的特性制定及驗(yàn)證。

2.2.1物理性狀

a.外觀

應(yīng)整潔完整、無(wú)毛刺、無(wú)破損、無(wú)污染；材料附著牢固。

b.寬度

寬度應(yīng)≥2.5mm。

c.移行速度

液體移行速度應(yīng)不低于10mm/min。

2.2.2準(zhǔn)確性

可參照YY/T 0478—2011《尿液分析試紙條》中“準(zhǔn)確度”的描述：檢測(cè)結(jié)果與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后配置的各濃度相差同向應(yīng)不超過(guò)一個(gè)量級(jí)，不得出現(xiàn)反向相差。陽(yáng)性參考溶液不得出現(xiàn)陰性結(jié)果，陰性參考溶液不得出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。

用最低檢出量樣本作為陽(yáng)性參考液，促黃體生成素 0mIU/mL作為陰性參考液。

具體要求及方法由申報(bào)單位根據(jù)自身產(chǎn)品的特性制定及驗(yàn)證，且標(biāo)準(zhǔn)比色卡應(yīng)具有明確的溯源性。

注：該產(chǎn)品有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品。

2.2.3最低檢出量

應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)聲稱的要求，但不得高于25 mIU/mL。

2.2.4重復(fù)性

隨機(jī)抽取同批試劑10份，檢測(cè)至少三個(gè)濃度水平的促黃體生成素重復(fù)性參考品，檢測(cè)線顯色應(yīng)均與對(duì)應(yīng)濃度色標(biāo)顏色深度一致，顯色度均一。

2.2.5批間精密度

隨機(jī)抽取三批試劑，選取醫(yī)學(xué)決定水平處濃度的促黃體生成素重復(fù)性參考品進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)檢測(cè)10次，檢測(cè)線顯色應(yīng)均與對(duì)應(yīng)濃度色標(biāo)顏色深度一致，顯色度均一。

（十）注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）要求，注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告及產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評(píng)價(jià)意見(jiàn)應(yīng)由具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具。該產(chǎn)品有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)當(dāng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)，并符合相關(guān)要求。

（十一）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

說(shuō)明書(shū)承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、實(shí)驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。

結(jié)合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，下面對(duì)促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

1．【產(chǎn)品名稱】  

1.1試劑名稱由三部分組成。被測(cè)物質(zhì)的名稱、用途、方法或者原理。如：促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）。

1.2英文名稱：英文名稱應(yīng)當(dāng)正確、完整，不宜只寫縮寫。

2.【包裝規(guī)格】

2.1應(yīng)注明可測(cè)試的樣本數(shù)或裝量：如1條/袋（為最典型的包裝規(guī)格）：10條/盒。

（1）應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求包裝規(guī)格一致；

（2）如不同型號(hào)產(chǎn)品的包裝規(guī)格不同，應(yīng)分別進(jìn)行描述。

3.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

3.1第一段內(nèi)容詳細(xì)說(shuō)明產(chǎn)品的預(yù)期用途，如定性或半定量檢測(cè)等，樣本類型和被測(cè)物等，具體表述形式根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)做適當(dāng)調(diào)整。如：用于體外定性或半定量檢測(cè)女性尿液中的促黃體生成素水平。

3.2第二段內(nèi)容說(shuō)明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證及背景情況，說(shuō)明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等。

4.【檢驗(yàn)原理】

應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分詳細(xì)說(shuō)明檢驗(yàn)原理、方法，必要時(shí)可采用圖示方法描述。

5.【主要組成成分】

5.1說(shuō)明試劑包含組成、數(shù)量等信息。

5.2建議對(duì)所包被抗體的相關(guān)信息進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹。

5.3如試劑中包含耗材，應(yīng)列明耗材名稱、數(shù)量等信息。如尿杯、自封袋等。

6.【儲(chǔ)存條件及有效期】

對(duì)試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等信息做詳細(xì)介紹。并對(duì)開(kāi)封后未使用產(chǎn)品允許暴露于空氣中的溫度、濕度及期限等條件予以明確。

7.【樣本要求】

重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

7.1重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長(zhǎng)期），運(yùn)輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否須恢復(fù)室溫，可凍融次數(shù)。特殊體液標(biāo)本還應(yīng)詳細(xì)描述對(duì)采集條件、保存液、容器等可能影響檢測(cè)結(jié)果的要求。應(yīng)對(duì)已知的干擾物進(jìn)行說(shuō)明，同時(shí)列出干擾物的具體濃度。

7.2樣本是否受留樣時(shí)間、臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，如：①采集尿樣前2小時(shí)應(yīng)避免大量喝水及其他水分?jǐn)z入以免影響“促黃體生成素峰”值的檢測(cè)。②建議收集尿液的時(shí)間是XXXX。

7.3如不能采用新鮮樣本應(yīng)注明樣本保存條件及期限。

7.4當(dāng)促黃體生成素濃度超過(guò)一定濃度時(shí)，可能發(fā)生鉤狀效應(yīng)，若樣本稀釋后可再測(cè)，應(yīng)明確具體稀釋方法和比例。

申報(bào)單位應(yīng)根據(jù)自身產(chǎn)品的特點(diǎn)研究制定樣本要求，并對(duì)各項(xiàng)要求進(jìn)行分析驗(yàn)證。

8.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟

8.1實(shí)驗(yàn)環(huán)境：溫、濕度條件要求。

8.2試劑使用方法、注意事項(xiàng)，試劑條/卡/筆開(kāi)封后注意事項(xiàng)等。

8.3明確樣本加樣時(shí)間、觀察時(shí)間及加樣方法。

8.4為了更準(zhǔn)確地找到使用者個(gè)人的“促黃體生成素”峰值，建議說(shuō)明檢測(cè)頻率。如：開(kāi)始檢測(cè)時(shí)，每天應(yīng)至少檢測(cè)1次。

8.5對(duì)于半定量產(chǎn)品，應(yīng)明確說(shuō)明上樣量，以保證半定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

9.1可結(jié)合圖示方法說(shuō)明無(wú)效、陰性及陽(yáng)性結(jié)果的判讀示例。說(shuō)明在何種情況下應(yīng)對(duì)樣本進(jìn)行重復(fù)測(cè)試，以及在重復(fù)測(cè)試時(shí)需要采取的樣本處理方式。

9.2針對(duì)半定量產(chǎn)品，建議有促黃體生成素波動(dòng)曲線圖的繪制的說(shuō)明。

如：使用者根據(jù)生產(chǎn)商提供的標(biāo)準(zhǔn)比色卡，將試紙每天測(cè)到的數(shù)據(jù)在實(shí)際檢測(cè)圖上相應(yīng)的位置描點(diǎn)，其中橫軸為測(cè)定次數(shù)，縱軸為促黃體生成素?cái)?shù)值（測(cè)定結(jié)果），依順序?qū)⑽恢命c(diǎn)連起來(lái)，就得到一張促黃體生成素波動(dòng)曲線圖。從曲線圖上可以清楚地了解促黃體生成素的峰形圖。

10.【檢驗(yàn)方法局限性】  

至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：

10.1應(yīng)明確標(biāo)注，該檢測(cè)方法只能用于尿液中促黃體生成素水平的監(jiān)測(cè)，不能用于排卵的診斷和篩查，亦不能用于其他與激素分泌紊亂有關(guān)的促黃體生成素檢測(cè)。

10.2測(cè)試樣本不新鮮、不潔凈或有雜質(zhì)等均會(huì)干擾測(cè)試，產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。尿液收集裝置不潔凈或操作不當(dāng)也會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。明確干擾物質(zhì)及濃度范圍對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，申請(qǐng)人可根據(jù)自身情況對(duì)特殊干擾物進(jìn)行說(shuō)明，并注明可接受的最高限值。

10.3本試劑無(wú)論為定性或半定量，均不能確定樣本的促黃體生成素準(zhǔn)確含量，精確定量應(yīng)使用其他方法。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述該產(chǎn)品重要的性能指標(biāo)。

12.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1本試劑僅供體外檢測(cè)人體尿液。

12.2本試劑為一次性使用體外診斷試劑，請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用，切勿重復(fù)使用。

12.3服用避孕藥會(huì)影響測(cè)試結(jié)果，應(yīng)在停藥三個(gè)月后再使用本品。

12.4質(zhì)控區(qū)（C）無(wú)紅色反應(yīng)線出現(xiàn)，測(cè)試結(jié)果無(wú)效，需用新的試劑重測(cè)。

12.5鋁箔復(fù)合包裝袋里有干燥劑，不得內(nèi)服。

12.6本產(chǎn)品為體外診斷試劑，最終的確診應(yīng)由醫(yī)生綜合各檢測(cè)指標(biāo)及臨床癥狀后作出。

12.7在同一個(gè)檢測(cè)周期中建議使用同一批號(hào)試紙進(jìn)行檢測(cè)。

12.8對(duì)所有樣本和使用后產(chǎn)品都應(yīng)視為傳染源對(duì)待。

12.9其他需要說(shuō)明的注意事項(xiàng)。

三、審查關(guān)注點(diǎn)

（一）關(guān)注產(chǎn)品預(yù)期用途有關(guān)的描述是否與臨床研究結(jié)論一致。臨床研究用對(duì)比試劑和第三方確認(rèn)試劑的預(yù)期用途應(yīng)與申請(qǐng)產(chǎn)品預(yù)期用途一致。申報(bào)樣本類型應(yīng)在臨床研究中進(jìn)行驗(yàn)證。

（二）審查產(chǎn)品技術(shù)要求時(shí)應(yīng)注意產(chǎn)品應(yīng)符合現(xiàn)行有效的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)規(guī)定。

（三）說(shuō)明書(shū)中預(yù)期用途、儲(chǔ)存條件及有效期、檢驗(yàn)方法、陽(yáng)性判斷值或參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標(biāo)、檢驗(yàn)方法的局限性等描述應(yīng)分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系研究資料、參考區(qū)間研究資料、分析性能評(píng)估資料的研究結(jié)論相一致。

（四）技術(shù)要求的設(shè)定及注冊(cè)檢驗(yàn)是否使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品。

四、編寫單位

廣東省食品藥品監(jiān)督管理局審評(píng)認(rèn)證中心。